PNAS:中国科学家开发出高阶多重实时荧光PCR检测技术

资料来源：科技部生物中心，2022-03-24 08336026

实时PCR是目前应用最广泛的核酸检测技术。但由于主流荧光PCR仪检测通道数量的限制，单个反应很难检测到6个以上的靶基因，限制了该技术在检测涉及多个靶标的复杂疾病中的应用。厦大的研究团队在《美国国家科学院院刊》 (PNAS)杂志上发表了题为“Couplin的高度多重PCR检测”

实时PCR是目前应用最广泛的核酸检测技术。但由于主流荧光PCR仪检测通道数量的限制，单个反应很难检测到6个以上的靶基因，限制了该技术在检测涉及多个靶标的复杂疾病中的应用。

厦大的研究团队在《美国国家科学院院刊》 (PNAS)杂志上发表了题为“通过偶联Taq DNA聚合酶的5’-活瓣内切核活性和分子信标(Eporters)进行高度多重PCR检测”的论文，开发了一种新的荧光PCR技术，称为“MeltArray”，将荧光PCR的单管检测能力提高了至少一个数量级。

在该技术中，利用Taq DNA聚合酶在荧光PCR反应中的5’-瓣膜核酸内切酶活性，切割位于引物下游的“介质探针”以释放“介质引物”，该介质引物与反应体系中的分子信标报告探针结合。“中引物”在Taq酶聚合活性的作用下，沿着分子信标延伸，产生具有特定熔点的荧光双链。因为每个分子信标可以允许多个“介质引物”形成一系列具有不同熔点值的荧光双链，所以单个MeltArray多重荧光PCR反应可以检测到的靶基因总数等于反应中分子信标的数量乘以它所包含的“介质引物”的数量。研究团队实现了单个荧光通道可以检测12个目标，6个荧光通道的仪器可以检测72个目标，这是目前单个闭管实时荧光PCR一步法可以检测的目标基因的最大数量。

研究证实，MeltArray多重荧光PCR技术在不改变现有仪器设备的情况下，对疾病、传染病和分子具有良好的敏感性和特异性，成功地将荧光PCR这一古老技术推向了一个新的高度，填补了长期以来低阶PCR和高通量检测之间的技术空白。(100yiyao.com)

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