Nature子刊：厦门大学刘亮团队揭示CRISPR

Nature子刊：厦门大学刘亮团队揭示CRISPR-Cas9系统的新型核酸酶活性，并建立全新核酸检测平台

来源：生物世界 2024-06-04 09:52

该研究证实了Cas9存在新的核酸酶活性，并拓展了Cas9除基因编辑工具以外的应用，同时为基因编辑提供了一定的指导作用，将进一步推进CRISPR检测在分子诊断领域的发展。

厦门大学生命科学学院刘亮教授课题组在Nature Biotechnology期刊发表了题为：Trans-nuclease activity of Cas9 activated by DNA or RNA target binding的研究论文。

该研究首次揭示了tracrRNA（trans-activating crRNA）crRNA结合形成的gRNA引导的Cas9在特异性地识别目标DNA或RNA分子后对非目标核酸分子（DNA或RNA）展现出高效的反式切割活性。

根据该特性，研究团队开发了基于Cas9反式切割活性的新型核酸检测平台，实现了对多种病毒和肿瘤耐药性突变的高灵敏度和特异性的检测。

在这项研究中，研究团队发现，target DNA激活了Cas9-sgRNA的反式切割活性。但该系统所表现出的反式切割活性较弱，一定程度上影响了Cas9-sgRNA系统在后续核酸检测方面的应用。然后，研究团队采用了Cas9-tracrRNA-crRNA系统对Cas9的反式切割活性进行检测。结果表明，在双引导RNA系统（tracrRNA-crRNA）的协助下，Cas9的反式切割活性得到了显著提升：不仅对poly T/C/A分子均展现出了反式切割活性，还可在目标核酸分子存在的情况下对M13噬菌体基因组ssDNA分子实现非特异切割。

研究团队进一步获得了Cas9-sgRNA-target RNA三元复合物的晶体结构，通过结构研究揭示了Cas9系统靶向目标RNA的原子基础。

基于Cas9上述新活性，研究团队结合核酸扩增技术开发了两款名为DACD（DNA-activated Cas9 Detection）和RACD（RNA-activated Cas9 Detection）的核酸检测工具。采用该检测平台，研究团队实现了对猴痘病毒、呼吸道合胞病毒的高特异性、高灵敏度的快速检测。同时，Cas9-tracrRNA-crRNA系统在单核苷酸多态性检测中表现出了很强的特异性。在选取的靶序列仅存在单核苷酸差异的情况下，DACD和RACD法均可准确区分来自猴痘病毒刚果毒株和西非毒株的B6R基因。

综上，该研究证实了Cas9存在新的核酸酶活性，并拓展了Cas9除基因编辑工具以外的应用，同时为基因编辑提供了一定的指导作用，将进一步推进CRISPR检测在分子领域的发展。

厦门大学生命科学学院刘亮教授为该论文的通讯作者，厦门大学生科院助理教授陈霁云、 2022级博士研究生陈莹、2021级博士研究生黄玲珑为该论文的共同第一作者。

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