Nucleic Acids Research：NOVA2调控神经CircRNA生物产生

选择性剪接(AS)影响95%的人类多外显子基因。通过AS，数十万种具备分歧构造属性、定位形式和翻译效率的RNA异构体可以表白为具备分歧功效的卵白质异构体。在哺乳植物的神经体系中，AS尤其广泛和高度激进。在年夜脑发育进程中，AS担任在特定的阶段树立神经元特异的剪接形式，而发育调理的替代外显子在突触造成、神经元迁徙和轴突领导中起侧重要作用。发育进程中特定阶段的AS形式是由在神经元中丰厚或特异表白的RNA联合卵白(RBPs)节制的，对正常发育至关紧张，由于它们的失调是许多神经疾病的根底。

环状RNA(CircRNA)是通过反向剪接发生的，这是AS的一种。在反向剪接进程中，上游的5’剪接位点(SS)与下游的3’发生抗外切核糖核酸酶的闭环‘圈’的环化外显子的SS。最具特征性的CircRNA起源于卵白质编码基因的正文外显子，许多外显子自力于宿主基因调理，并在分歧的光阴点表示出共同的表白形式。到今朝为止，人们以为CircRNA的功效包含隔离microRNAs、翻译小肽、调理免疫反馈、运输和支架限定性贸易常规。CircRNA在全基因组程度上富集于脑组织中，并在神经分解和成熟进程中显著上调。作者还发现CircRNAs在苍老进程中会积累，这种趋向仿佛只呈现在脑组织和神经元中。年夜脑表白的CircRNA的功效意义正在浮现，只有少数CircRNA被发当初神经体系中发扬作用。

已确定了几种限定性贸易常规来调理CircRNA的生物产生，包含蝇眼、颤栗(QKI)、ADAR、FUS以及几种hnRNPs和SR卵白。然而，从活体脑或神经元数据集缺乏限定性贸易常规对CircRNA调控的研讨。有几个特征明白的剪接因子在神经体系中起作用，包含RBFOX1/2/3、PTPBP1/2、nrSR100/SRRM4、Hu卵白和NOVA1/2。这些剪接因子中任何一个的缺失或失调都邑招致重大的、往往是致命的神经缺点。最具特征性的神经丰厚剪接因子是nov A卵白，它最初被发现是副性视阵挛肌阵挛共济失调患者的本身抗原，这是一种以活动和认知缺点为特征的神经体系疾病。Nov A1和Nov A2是与Yca Y基序簇联合以调理AS的相似物。在小鼠中，任何一种基因敲除(KO)都邑招致晚期灭亡。这归因于NOVA1缺乏症中活动神经元的灭亡，以及皮层和浦肯野神经元在N O VA2中的异常迁徙。尽管这两种卵白质辨认雷同的RNA联合基序，但它们的表白在很年夜水平上是互相的。例如，免疫组织化学和原位杂交数据显示NOVA2在中脑和脊髓低表白，而在皮层和海马高表白。相反，nov a1在中脑和脊髓高表白，在皮层绝对低表白。此外，NOVA1和NOVA2仿佛节制着发育中皮层中分歧的剪接调控网络。比来，兴奋性(Emx1+)或克制性(GAD2+)神经元中NOVA2的前提性敲除(CKO)招致了数以千计的AS变乱，这些变乱在很年夜水平上是每种细胞类型所独占的。此外，兴奋性神经元中NOVA2的丧失招致皮层和海马层构造的错乱，而NOVA2-KO克制神经元中未察看到这种环境。这些发现显示了在分歧神经元亚型中查看AS成果的紧张性。

人工后拼接申报的示用意

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为了构建人工CircMini-WT，将含有全长GFP编码序列、部门人ZKSCAN1内含子序列和部门Mboat2内含子序列的两个gBlock克隆到上述改良的pUC19中。作者使用默许设置的伯克利果蝇基因组筹划剪接预测对象来指导GFP和内含子序列的批改，这将进步剪接效率并避免不测剪接产品的发生。此外，现有的YCA Y基序也产生了渐变，以阻止Nov A2联合。人工10x YCA Y序列通过gBlock发生，并被克隆到与CircRNA基因座相关的50bp下游(pMini-up)、49bp上游(PMiniDown)或两个地位(pMini-Both)。（ 100yiyao.com）