ACS Nano:科研职员倒退新型卵白质互作成像技术

起源：将来技术学院 2021-09-09 08:42

比来，将来技术学院生物医学工程系陈匡时传授课题组基于双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescence Complementation，BiFC）技术，倒退了一种可以在纳米标准下研讨细胞内卵白质互相作用的新型成像技术。该技术降服了传统BiFC技术易发生假阳性旌旗灯号的成绩，并被用于在纳米标准下解析宿主细胞紧张卵白质参加HIV

比来，将来技术学院生物医学工程系陈匡时传授课题组基于双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescence Complementation，BiFC）技术，倒退了一种可以在标准下研讨细胞内卵白质互相作用的新型成像技术。该技术降服了传统BiFC技术易发生假阳性旌旗灯号的成绩，并被用于在标准下解析宿主细胞紧张卵白质参加HIV-1病毒组装的任务形式。该研讨结果已颁发于学术期刊ACS Nano，标题为“A Background Assessable and Correctable Bimolecular Fluorescence Complementation System for Nanoscopic Single-Molecule Imaging of Intracellular Protein-Protein Interactions”。

BiFC技术是一种可在细胞内成像卵白质互相作用的办法，其原理是将一个完全的荧光卵白联系成两个非荧光片断，再将这两个非荧光片断别离与能够产生互相作用的两个目的卵白连贯造成交融卵白，当目的卵白在细胞内互相作用时，这两个非荧光片断会因为空间间隔的凑近造成完全的荧光卵白。然而，在目的卵白不产生互相作用的环境下，两个非荧光片断也能够因为随机碰撞而自组装成完全的荧光卵白，发生假阳性旌旗灯号，这限定了BiFC技术对目的卵白互相作用的定量研讨。为了降服这一成绩，陈匡时课题组开辟了一种可能检测并打消这种由非荧光片断自组装发生的假阳性旌旗灯号的办法，并将其定名为BAC-BiFC（Background Assessable and Correctable-Bimolecular Fluorescence Complementation）（图1）。详细来说，他们给BiFC中的一个目的卵白连贯上一个参考荧光卵白，该参考荧光卵白不仅可用来表征目的卵白在细胞内的表白程度与空间散布，还使得研讨者可以通过比率成像判断分歧卵白表白程度下假阳性旌旗灯号的强弱，从而得到不受假阳性旌旗灯号烦扰的试验前提。

“通过倒退新的超分辩BiFC技术，咱们发现宿主细胞AGO2卵白参加了HIV-1病毒颗粒组装的全进程，是病毒增殖不行或缺的原件。这一发现无望为HIV病毒和其他逆转录病毒的研讨提供新的角度。”陈匡时表现。

在HIV-1病毒的增殖进程中，其构造卵白Gag必要与泛滥宿主细胞卵白产生互相作用以实现病毒颗粒的组装与出芽。研讨者应用BAC-BiFC技术，在标准下对Gag卵白与宿主细胞卵白AGO2之间的互相作用进行了研讨【通过联合超分辩率显微技术direct stochastic optical reconstruction microscopy（dSTORM）完成】。与古人的研讨成果分歧，研讨者发现Gag卵白并非只介导病毒颗粒包装固定数目的AGO2，而是在病毒组装前期招募了更多的AGO2（图2），这提示AGO2参加了HIV-1病毒颗粒组装的全进程，是病毒增殖不行或缺的原件。这一发现无望为HIV-1病毒和其他逆转录病毒的研讨提供新的角度。值得一提的是，除了本任务所波及的研讨工具外，BAC-BiFC技术也具备对性命进程中其它各种卵白质互相作用甚至其它生物分子之间的互相作用进行可视化研讨的后劲。(100yiyao.com）

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