单个外泌体表征分析技术2022年Nano Letters盘点丨助力MSC外泌体、单外泌体亚群分析的研究!

由于外泌体在和治疗领域具有巨大潜力，因此单外泌体水平检测一直是研究热点。目前大多数的外泌体分析技术主要基于成像，但是较多成像技术检测的粒子数量级有限，很难实现临床样本的高通量检测（大于108EV/ml）。此外，单一平台实现检测灵敏度达到单外泌体水平、区分外泌体的不同亚群特异性以及高通量分析非常具有挑战性。近期Zijian Yang等[2]发明了一种高通量数字测定法，这是一种基于液滴可以对特定的单外泌体亚群进行高通量量化分析的光流控平台（DEVA）。

其中，研究人员使用ExoView对来源于人类神经元的外泌体进行分析，对开发的DEVA系统进行评估。ExoView可以通过免疫捕获和荧光标记对外泌体进行分析，红色荧光抗体代表CD63，绿色荧光抗体代表CD81，蓝色荧光抗体代表CD9（图2 A和B）。亚群计数结果显示CD81+外泌体数量显着高于CD63+或CD9+外泌体（p 0.05，p 0.0001），也显着高于MIgG阴性对照（p 0.0001)（图2 C）。CD81+外泌体的荧光共定位分析显示每个标记组代表一个不同的外泌体亚群，互相没有交集，其中只标记CD81荧光抗体的外泌体数量最多，其次是只标记CD63荧光抗体和同时标记CD63CD81荧光抗体的外泌体（图2 D）。另外，在CD81+外泌体中，67% (64.3%-69.8%) 的外泌体同时共表达了另一个CD81蛋白（荧光标记）（图2 E）。因此，研究人员选择使用CD81进行捕获和标记，而不是使用神经元特定的表面蛋白标记物，这样能够量化和校准DEVA的性能。

图2 ExoView的原理示意图以及ExoView检测人类神经元的外泌体的亚群数量、共定位和进行荧光成像