Cell子刊:邹鹏团队报道基于荧光成像的蛋白质定向进化方法 |
来源:生物世界 2023-08-07 09:05
由于Faculae方法能够在哺乳动物细胞中高效构建突变体文库,并在显微镜下鉴定细胞表型并快速选择细胞,该方法为进化荧光探针、化学遗传学元件和光遗传学元件等蛋白质工具提供了新思路。近日,北京大学化学与分子工程学院、合成与功能生物分子中心、IDG麦戈文脑科学研究所、北大-清华生命科学联合中心邹鹏课题组(博士生林畅为第一作者)在Cell子刊CellReportsMethods上发表了题为:Functional imaging-guided cell selection for evolving genetically encoded fluorescent indicators的研究论文。
该研究报道了基于荧光成像的定向进化方法 Faculae,可在哺乳动物细胞中高效稳定构建突变体文库,在显微镜下针对混合细胞文库中的优势表型细胞进行快速光激活选择。该方法实现了遗传编码远红色钙探针的多维度表型筛选与定向进化。
荧光探针定向进化的难点在于需要考虑多种荧光表型参数,包括荧光强度和动态响应幅度等,无法直接通过流式分选方法进行筛选,而常用的多孔板阵列文库成像筛选存在通量较低(~103)局限性,因此研究者认为可以开发一种基于荧光成像的混合细胞文库鉴定、选择方法,在保留多筛选维度的同时提高筛选通量、扩大蛋白质序列的搜索空间。
图1:Faculae方法流程示意图
在Faculae方法中,研究者使用基于重组酶的细胞 停机坪 (cell landing pad)方法实现高效稳定的哺乳动物细胞文库构建,通过聚焦照明实现单细胞分辨的胞内光敏荧光分子激活, 点亮 具有优势表型的目标细胞,进而通过流式分选回收得到突变体基因型。该技术的特点在于可以利用荧光成像评估细胞内荧光信号的动态变化信息和亚细胞定位信息,单次实验的细胞鉴定数量为104到105,而单个目标细胞激活仅需1-2秒。利用Faculae方法,研究者对远红色钙探针的亮度与动态响应两个指标同时开展评估,从中选择优势突变体,并通过迭代进化成功获得灵敏度提升的Nier1探针。
图2:通过Faculae筛选得到的远红色钙探针Nier1s和Nier1b在神经细胞中分别具有更高响应和更高亮度 由于Faculae方法能够在哺乳动物细胞中高效构建突变体文库,并在显微镜下鉴定细胞表型并快速选择细胞,该方法为进化荧光探针、化学遗传学元件和光遗传学元件等蛋白质工具提供了新思路。与此同时,该方法也提供了一种在显微镜下简单、快速选择多个目标细胞的新策略,已成功应用于纯化多能向心肌细胞分化过程中的中间态细胞。 版权声明 本网站所有注明“来源:100医药网”或“来源:bioon”的文字、图片和音视频资料,版权均属于100医药网网站所有。非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,否则将追究法律责任。取得书面授权转载时,须注明“来源:100医药网”。其它来源的文章系转载文章,本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,转载内容不代表本站立场。不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。 87%用户都在用100医药网APP 随时阅读、评论、分享交流 请扫描二维码下载-> 医药网新闻- 相关报道
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