Immunity:自噬调理内皮连贯以克制炎症时代中性粒细胞的渗出

中性粒细胞从血液轮回迁徙到感化或毁伤部位是一种症结的免疫反馈，必要毁坏血管外部的内皮细胞(EC)，而不受调控的中性粒细胞跨内皮细胞迁徙(TEM)是致病性的，但其心理终止的分子根底仍旧未知。巨自噬/经典自噬是一种退化激进进程，可能将细胞质内容物递送至溶酶体进行降解，典型自噬已成为后天免疫功效的中间调理器，包含细胞因子的发生、免疫细胞的分解和病原体肃清。尽管有足够的证据标明免疫细胞自噬相关基因调理炎症，但对EC 自噬在这方面的作用知之甚少，然而，自噬是许多EC功效的稳态调理剂，最显著的是EC存活和发育性血管天生，而且是许多血管疾病的症结调理剂。

图片起源：https://doi.org/10.1016/j.immuni.2021.07.012

该研讨证实了发炎组织中小静脉的EC表示出弱小的自噬反馈，该反馈在光阴上与中性粒细胞运输的峰值一致，而且严厉定位于EC打仗。 EC自噬的遗传溶解招致小鼠炎症模子中适度的中性粒细胞TEM和不受节制的白细胞迁徙，而自噬的药理学诱导克制中性粒细胞浸润到组织中。从机制上讲，自噬调理EC连贯的重塑和症结EC粘附分子的表白，匆匆进它们的细胞内运输和降解。该研讨确定自噬是一种旨在终止心理炎症的EC白细胞运输机制的调理剂。

ECs在体内表示出GFP-LC3雀斑以相应饥饿和炎症 图片起源：https://doi.org/10.1016/j.immuni.2021.07.012

急性发炎的微血管EC在血管连贯处表示出自噬诱导 图片起源：https://doi.org/10.1016/j.immuni.2021.07.012

为了研讨自噬在体内与中性粒细胞转运的光阴谱相关的潜在作用，研讨者树立了一种共聚焦显微镜办法，使用GFP-LC3转基因小鼠(GFP-Map1lc3aTG/+)，察看和量化睾提肌的毛细血管后小静脉(PCVs)中LC3点的造成。最初的试验检测到微静脉ECs中GFP-LC3雀斑的数目添加以相应养分饥饿，这是一种无效的典型自噬刺激剂；局部给药III类磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)克制剂3-甲基腺嘌呤(3MA)，这是一种成熟的饥饿诱导自噬体造成阻滞剂，显著下降ECs中显示GFP-LC3点的总ECs的百分比和这些细胞器的数目。

该研讨还探讨了在缺血再贯注毁伤的急性炎症模子(IR；缺血40分钟，然后再贯注长达8小时)进程中这种反馈的产生率，这种反馈的特色是在再贯注阶段中性粒细胞年夜量但长久的浸润，在4小时到达峰值，再贯注后8小时降低到根底程度。在承受IR(4小时再贯注)的组织中，迁徙的中性粒细胞表示出GFP-LC3雀斑；IR后，动脉ECs的GFP-LC3雀斑数没有变动，但静脉ECs 表示出自噬反馈的微弱添加；与饥饿后更弥散的雀斑散布分歧，在IR刺激的小静脉中，这种添加完整是因为PECAM-1+ EC打仗处存在GFP-LC3雀斑所致。通过免疫荧光(IF)染色对内源性LC3雀斑进行的量化显示出相似的成果，阐明GFP-LC3和EC中的家养型(WT)卵白之间的类似活性。在研讨自噬诱导的光阴进程中，GFP-LC3雀斑造成仅在中性粒细胞迁徙反馈的峰值处显着，并在中性粒细胞浸润结束阶段向节制量降低；脂多糖(LPS)刺激的组织(4小时)，异样以中性粒细胞浸润为特征，表示出相似的EC连贯GFP-LC3点位。这些成果标明，在中性粒细胞炎症反馈时，EC在细胞-细胞打仗处显示出添加的LC3雀斑，标明自噬进程能够在调理EC连贯中发扬作用，是以免疫细胞浸润到组织中。

EC自噬的调理节制中性粒细胞外渗和细胞组织毁伤 图片起源：https://doi.org/10.1016/j.immuni.2021.07.012

该研讨评价了EC自噬缺点对中性粒细胞TEM的影响，使用了构成型EC Atg5缺失模子，为了额定提供一种及时跟踪中性粒细胞迁徙的办法，通过骨髓移植从Lyz2-EGFP基因靶向小鼠到受照耀的Atg5ΔEC和 Atg5fl/fl小鼠发生嵌合小鼠。对局部LPS刺激或承受IR(4小时再贯注)的小鼠提睾肌中的总中性粒细胞浸润的阐发标明，与嵌合 Atg5fl/fl对照相比，嵌合Atg5ΔEC小鼠的中性粒细胞浸润添加。相似地，可诱导的EC自噬缺点小鼠Atg5iΔEC在提睾肌IR后表示出升高的中性粒细胞浸润反馈；在研讨由EC自噬缺点惹起的强烈中性粒细胞浸润的潜在病理心理效果时，碘化丙啶阳性标明Atg5ΔEC小鼠发炎组织中受损细胞数目添加。这些成果标明 EC自噬在中性粒细胞浸润到体内急性炎症组织中的负调理作用，提供了维护宿主免受适度中性粒细胞介导的组织毁伤的机制，为此，研讨者使用了一种细胞浸透自噬诱导肽Tat-Beclin1，它可以激活自噬的次要调理因子Beclin1。Tat-Beclin 1的局部利用，以ATG5依赖性方式在小静脉ECs中诱导GFP-LC3和内源性LC3雀斑，它的药理学战略克制了IR刺激的提睾肌中的中性粒细胞浸润，但这种作用在Atg5iΔEC小鼠中被废弃，标明Tat-Beclin1对EC自噬诱导具备特同性的功能。Tat-Beclin1克制中性粒细胞浸润到组织中与中性粒细胞在血管腔内的滞留添加一致，标明 EC自噬在中性粒细胞毁坏EC中的调理作用。