J IMMUNOTHER CANCER:CTLA4启动子低甲基化在初始诊断时是一种阴性预后生物标记物，但可预测通明细胞肾细胞癌中基于抗PD

在癌症免疫医治期间，针对细胞毒性T淋巴细胞相关卵白4 (CTLA-4)和/或法式性细胞灭亡受体/配体1 (PD-1/PD-L1)轴的免疫查看点阻断(ICB)的利用改善了早期通明细胞肾细胞癌(ccRCC)的临床疗效成果。抗PD-1和抗CTLA-4的组合以及抗PD-1/PD-L1加酪氨酸激酶克制剂(TKI)的组合今朝都被用作转移性ccRCC的一线医治，因为比拟这些一线疗法的前瞻性临床实验仍在进行中，今朝两种疗法组合在国内转移性肾细胞癌数据库同盟(IMDC)界说的中危组和低危组中被以为是等效的。然而，在今朝这种环境下，转移性ccRCC的临床情况中短少用于最佳后期医治决议计划和医治次序的弱小生物标记物。

图片起源：http://dx.doi.org/10.1136/jitc-2021-002949

肿瘤内涵PD-L1的表白可预测各类肿瘤实体对立PD-1ICB的反馈，但在ccRCC中它的用途无限，此外，评价抗PD-1阻断无效性的预测性生物标记物在ccRCC中的相关性也无限，由于PD-1/PD-L1免疫轴在两种一线医治中都是靶向的，作为以后一线医治的主干ccRCC医治。虽然抗CTLA-4单药疗法具备高度的临床相关性，但今朝也缺乏其弱小的预测性生物标记物，在这种环境下，研讨者比来的研讨可能提供强无力的证据，标明CTLA-4编码基因CTLA4的甲基化状态可以预测彩色素瘤患者对立PD-1和抗CTLA-4靶向ICB以及抗CTLA-4单药医治的反馈。是以，该研讨全面阐发了ccRCC中CTLA4的启动子DNA甲基化状态，波及转录活性、临床病理参数（包含存活率和对ICB和TKI的反馈）、免疫细胞浸润和烦扰素-γ特征。相识ccRCC中CTLA4的表观遗传调控具备紧张意义，由于它能够有愿望作为预测性生物标记物，从而在个别化医治期间的ccRCC患者中做出支持或否决ICB+ICB的更合理的医治决议计划。

位于CTLA4中央启动子区域的两个胞嘧啶—磷酸—鸟嘌呤(CpG)位点的甲基化成果 图片起源：http://dx.doi.org/10.1136/jitc-2021-002949

为了在自力行列步队中验证上述成果，研讨者使用了定量甲基化特同性聚合酶链式反馈(qMSP)测定评价了波恩年夜学病院(UHB)非ICB行列步队(n=116)中的CTLA4启动子甲基化，qMSP靶向CpG1和一个位于CpG1下游13个碱基对(bp)的相邻CpG位点（称为CpG2），成果标明，与正常附近肾组织(NAT)相比，两个评价的CpG位点在ccRCC中均显示出显著的低甲基化(p 0.001)，相反，ccRCC中的CTLA4mRNA表白添加。此外，两个阐发的CpG位点都显示出高度的共甲基化(p 0.001)。随后，研讨者阐发了CTLA4基因的转录活性在多年夜水平上与其启动子区域的甲基化状态相关发现，在ccRCC中，启动子内两个CpG位点的低甲基化与CTLA4mRNA表白呈负相关，斯皮尔曼(Spearman)相关系数显著：CpG1:ρ=-0.54，CpG2:ρ= 0.51(p 0.001)，这些数据标明CTLA4基因的转录活性强烈依赖于其启动子甲基化。然而，在NAT中，CTLA4启动子甲基化与其mRNA表白之间没有显明的相关性，这能够是因为样本量低(n=24)或标明肿瘤特同性甲基化形式。

CTLA4mRNA表白和CpG1启动子甲基化与转移状态的联系关系 图片起源：http://dx.doi.org/10.1136/jitc-2021-002949

随后，该研讨额评价了CTLA4启动子甲基化和CTLA4转录活性在多年夜水平上与转移扩散ccRCC停顿的症结步调和临床成果相关，发现原发性ccRCC(TCGA行列步队)中CTLA4过表白和同时产生的低甲基化与转移性扩散亲密相关。通过中位CTLA4mRNA表白对行列步队进行二分后，过表白亚组在无变乱(EFS,HR:1.23[95%CI:1.12-1.36],p 0.001)和总生活期(OS,HR:1.25,95%CI:1.14-1.38], p 0.001)方面表示出更差的临床病程，是以，CpG1的启动子低甲基化与晦气的EFS(HR:0.36,(95%CI:0.22-0.60],p 0.001)和OS(HR:0.30,95%CI:[0.18-0.49],p 0.001)相关，而CpG2的甲基化状态仅显示一种趋向，与成果没有显著联系关系(EFS:HR=0.20,(95%CI:0.03-1.57), p=0.13; OS:HR=0.15,(95%CI:0.02-1.13), p=0.065)。

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研讨者发现CTLA4启动子低甲基化与丰厚的免疫细胞浸润形式相关，这验证了上述基于免疫基因组RNA-Seq特征的成果，即初始诊断时原发性ccRCC组织中的CTLA4低甲基化与UHB非ICB行列步队中晦气的EFS(HR:0.36 ,95%CI:0.17-0.78,p 0.010)和OS(HR:0.35,95%CI:0.16-0.75, p=0.007)显著相关。此外，医治前肾细胞癌(RCC)样本中的CTLA4启动子低甲基化预测了ICB医治反馈，与CTLA4低甲基化肿瘤对免疫医治的更好反馈一致，ICB医治开端后患者的PFS和OS缩短(PFS:HR=1.94,95%CI:1.09-3.44), p=0.024; OS:HR=2.14,95%CI:1.01-4.57, p=0.048)。这一发现特殊紧张，由于相比之下，初始诊断时的CTLA4低甲基化与较差的生活相关。