新见解！靶向miR的VEGFA

来源：100医疗网原创2022-04-22 09336043

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是一种强大的机制，它通过小分子调节RNA与靶mRNA之间的互补碱基配对，调节转录后选择的靶基因。使用基于RNAi的疗法，包括启动子驱动的短发夹RNA(shrna)。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是一种强大的机制，它通过小分子调节RNA与靶mRNA之间的互补碱基配对，调节转录后选择的靶基因。基于RNAi的治疗，包括启动子驱动的短发夹RNA(shrna)的使用，在基因治疗应用中具有巨大的潜力。

使用RNA干扰(RNAi)沉默靶基因的视网膜基因治疗需要有效性和安全性。短发夹RNA(shrna)对于RNAi是有用的，但是共传递的客体链的高表达水平和活性可能引起不利的细胞反应。AGO2依赖性shrna(agshrna)不产生客体链活性。

然而，必须仔细考虑与RNAi使用相关的几个问题。这些风险包括(1)发夹的引导链或共递送的客体链引起的非靶效应将影响非靶基因的表达水平的风险，(2)通过饱和的mirna加工途径与内源性Microrna(miRNAs)竞争的风险，(3)启动外源性小调节RNA过表达的细胞反应的风险。

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最近，丹麦奥尔胡斯大学的研究人员在《分子治疗3360核酸》杂志上发表了题为《Vegfa-靶向Mir-agshrna结合效率与原始基因th的特异性和安全性》的文章。Erapy的研究文章，该文章表明agshRNA和miR-agshRNA相对于shRNA具有重要优势，并从有效性、特异性和安全性方面提出了临床相关的方法。

为了提高疗效和研究安全性，研究人员制备了以VEGFA为靶点、内嵌microRNA(MiRNA)的agshrna(mir-agshrna)，并将这些RNAi效应子插入Pol II/III驱动的表达框架和慢病毒载体(LV)中。与相应的shRNAs相比，agshrna和miR-agshrna具有更高的特异性和安全性，同时保留了高的敲除效率和消除了客体链活性。

与shRNA相比，agshRNAs也导致细胞活力显著降低，并降低了与内源性miR21加工的竞争。LV转导的ARPE19细胞的RNA测序(RNA-seq)分析表明，与agshRNA相比，shRNA的表达通常会导致基因表达水平的更多变化，并激活相关通路。

在小鼠中，视网膜下注射编码组织特异性miR-agshrna的LV导致视网膜色素上皮(RPE)表达受限，并显著下调转导的RPE细胞中Vegfa的表达。

LV编码U6驱动的RNAi效应子可以产生广泛的序列依赖性和序列非依赖性效应。

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在这项研究中，研究人员将抗VEGFA miR-agshRNA与LV一起递送，支持了miR-agshRNA系统易于适应多个靶标的概念，并且由于表达盒的尺寸较小，其他递送系统可能同样有用，从而扩展了治疗的适用性。

总之，这些数据表明，agshRNAs，尤其是Pol II驱动的miRagshRNAs，在有效性、高内在特异性、安全性和通用性方面比经典shRNAs具有重要优势，非常适合未来基于基因治疗的眼内和眼内应用。(100yiyao.com)

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