研讨职员研发完成用于水稻黄单胞菌基因表白研讨的模块质粒组装体系

Molecular Plant Pathology在线颁发了上海交通年夜学农业与生物学院陈功友课题组题为“An improved， versatile and efficient modular plasmid assembly system for expression analyses of genes in Xanthomonas oryzae”的研讨论文。该研讨研发了一套模块质粒组装体系，解决了实用于水稻黄单胞菌的低拷贝DNA遗传操作效率低的瓶颈，将功效DNA模块，通过高拷贝的操作配景，转移至低拷贝的骨架上，用于基因的卵白表白、启动子活性、渐变体的功效互补以及病原菌的病程示踪等研讨。

动物病原黄单胞菌（Xanthomonas spp.）可能惹起400多莳植物的病害，形成重大的经济损失。在水稻上，由稻黄单胞菌(X. oryzae)的2个致病变种水稻白叶枯病菌（X. oryzae pv. oryzae， Xoo）和条斑病菌(X. oryzae pv. oryzicola， Xoc)惹起的白叶枯病和条斑病是水稻临盆上十分紧张的2个细菌病害，重大威逼我国水稻的平安临盆。Xoo和Xoc与水稻的互作已作为病原致病机制和寄主组织特同性研讨的形式体系。

Xoo和Xoc菌株存在较严厉的限定性修饰体系，仅许可一些具备宽广宿主范畴（broad-host-range）的在其细胞内复制和稳定存在，这些载体普通为低拷贝，加年夜了DNA操作的难度。是以，突破这个技术瓶颈，树立高效的基因表白研讨的载系统统具备紧张的意义。

该研讨设计出了一套模块化质粒组装体系，应用高拷贝的入门载体（Entry vector）和目的载体（Destination vector），联合合成生物学的办法，将基因表白的焦点元件造成模块，通过组装的方式，将交融元件在高拷贝质粒的操作配景下转入低拷贝的“骨架”载体（Backbone vector），将阳性克隆的得到率进步了20倍。作者证实了这套模块化质粒体系可能在体外、寄主水稻和非寄主烟草的互作情况下，无效利用于Xoo和Xoc毒性相关基因的转录表白和卵白表白阐发。另外，在骨架载体中引入分歧的终止子元件，可能赋予目标卵白分歧的表白程度，可以依据分歧的试验必要来定制目的基因的表白程度，利用于基因渐变体的功效互补研讨。

这套载系统统复杂、高效、多功效，且经济本钱低，也突破了原有系统的局限性，可能在活体动物组织中进行基因表白的定量测定。因其宽广的宿主个性，也实用于其他动物病原黄单胞菌。(100yiyao.com）