Nature子刊：首个用无病毒睡丽人基因转移制备的SLAMF7 CAR

图3.CARAMBA CAR构建体及制作工艺示用意，图片来自Gene Therapy, 2021, doi:10.1038/s41434-021-00254-w。

CARAMBA细胞的制作（图3B）统共必要14天。在从患者体内拆散出≥5×109个白细胞后，将得到的白细胞分为两部门，使得这两部门包括年夜约雷同数目的CD4+T细胞和CD8+ T细胞。通过在一个开放体系中的研讨级Miltenyi磁柱上，应用临床级抗体-微珠复合物和缓冲液进行免疫磁珠分选，使得这两批细胞富集CD4+T细胞或CD8+ T细胞。在T细胞经活化后，通过电穿孔将编码SB100X转座酶的mRNA和编码SLAMF7 CAR的MC载体转导到这些活化的T细胞中，然后将发生的SLAMF7 CAR-T细胞在体内进行扩增。

为了匆匆进应用靶向SLAMF7抗原的自体T细胞在难治性多发性骨髓瘤患者中展开初次人体CARAMBA，这些作者基于临床前研讨任务，树立了一个全新的临盆流程。由此发生的工艺（图3）遵循德国和欧洲司法和指南规则的严厉的GMP框架。CARAMBA的临盆进程随同着年夜量的进程中节制（in-process control, IPC）以下降危险，并有年夜量颠末正式验证的质量节制测试（作为预先确定的质量规范以及“仅供参考”的辅助测试），以确定CARAMBA产物的制药质量。工艺开辟遵循通常的次序，即研讨试验室的临床前工艺，辨认和鉴定适宜的肇端资料和原资料，确定质量规范，开辟需要的检测办法，包含正式的检检验证，工艺降级和工艺验证。在得到国度主管监管机构的方案审查和同意的同时，还得到了CARAMBA IMP的临盆受权。

CARAMBA：SLAMF7 CAR-T细胞的初次人体利用

CARAMBA临床实验包含I期剂量递增部门和IIa期剂量扩展部门，将招募多达38名多发性骨髓瘤患者。CARAMBA临床实验将在德国、西班牙、法国和意年夜利的特定所在招募。为了参与CARAMBA，患者必需知足一些归入和扫除尺度，例如患者之前至多承受过三种医治方案，包含卵白酶体克制剂（如硼替佐米和卡非佐米）、免疫调理剂（如来那度胺或泊马度胺）、单克隆抗体（如达雷木单抗），并且年夜多半患者都承受过高剂量化疗，随落后行了自体造血移植，才有资历参与这项临床实验。此外，患者必需有可丈量的骨髓瘤疾病标记物。曩昔承受过埃罗妥珠单抗（一种针对SLAMF7的单克隆抗体）医治的患者，有资历参与CARAMBA。

因为CAR-T细胞疗法能够是一种强化的医治办法，具备潜在的反作用，如细胞因子开释综合征（CRS）和神经毒性，是以还要求患者具备优越的表示状态，这种表示状态可用东部单干组（Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG）评分来掂量。患者的ECOG评分必需低于2分，象征着有较强的体能程度，能力参与这项临床实验。在确定CARAMBA的资历之前，患者必需有足够好的心脏、肝脏和肾脏功效，这些功效可由超声波和血液查看来评价。曩昔承受过异体造血移植的患者，要是这种移植在白细胞胞拆散日期至多12个月行进行，那么就有资历参与CARAMBA临床实验。患有GvHD和服用药物克制免疫体系的患者或有运动性感化（包含HIV、梅毒、乙肝和丙肝）的患者不契合参与CARAMBA临床实验的前提。CARAMBA临床实验的症结阐发终点包含掂量使用SLAMF7 CAR-T细胞医治骨髓瘤的可行性，由不良变乱（如CRS和神经毒性）的数目和重大水平评价的平安性，以及抗骨髓瘤疗效。另外，在CARAMBA中，将对CAR-T细胞医治配景下的生存质量和病院资本应用进行丈量。

瞻望：CAR-T细胞医治多发性骨髓瘤的证据

多发性骨髓瘤是一种常见的由异常浆细胞招致的血液恶性。多发性骨髓瘤的惯例医治包含化疗和卵白酶体克制剂等新型药物；然而，在过来十年中，体液免疫疗法和细胞免疫疗法正在改动对多发性骨髓瘤的医治。CAR-T细胞疗法是多发性骨髓瘤医治中最令人振奋的新倒退，并且使用靶向B细胞成熟抗原（BCMA）的CAR-T细胞有了新的临床证据。一些BCMA CAR-T细胞产物今朝正在临床开辟中，并在对一切既定的抗多发性骨髓瘤医治无反馈（难治性）的复发患者中完成了十分高的反馈率。总的来说，BCMA CAR-T细胞疗法显示了优越的平安性，CRS和神经毒性的产生率很低。然而，BCMA CAR-T细胞的临床教训也裸露了与靶向该抗原相关的一些挑战，疾病复发或医治抵制性的潜在机制包含抗原下调或乃至丢失。为应答这些挑战，今朝正在寻求一些战略，包含使用γ-排泄酶克制剂来进步多发性骨髓瘤细胞外表上的BCMA分子密度，削减血清中可溶性BCMA的数目，以及使器具有明白T细胞亚群构成和人源化靶向构造域的CAR来下降免疫原性，匆匆进定植和体内扩增。

图4.表白SLAMF7的多发性骨髓瘤细胞，用CAR-T细胞靶向它们。图片来自Gene Therapy, 2021, doi:10.1038/s41434-021-00254-w。

此外，今朝正在尽力辨认和验证多发性骨髓瘤中更多的CAR靶抗原，这些作者在CARAMBA临床实验中将重点评价SLAMF7作为一种新的候选抗原。一些研讨曾经证实了SLAMF7在恶性浆细胞外表上的高程度、均一性表白（图4A）。紧张的是，SLAMF7的表白在复发/难治性的多发性骨髓瘤患者中以及在之前的强化医治后仍旧保留。在曩昔的研讨任务中，这些作者已证实，在体外和体内的临床前模子中，表白SLAMF7 CAR的T细胞（图4B）对立多发性骨髓瘤的效劳年夜年夜高于抗SLAMF7抗体埃罗妥珠单抗，是以，他们热切期待CARAMBA的成果。（100医药网 100yiyao.com）

参考材料：

Sabrina Prommersberger et al. . Gene Therapy, 2021, doi:10.1038/s41434-021-00254-w.