发展一个新的PTD调停的IVT

来源：原创网站2021-11-23 14:47

强大的体外转录(IVT)mRNA恢复缺陷蛋白功能的潜在临床应用很大程度上依赖于其成功的细胞内传递和瞬时翻译，通过开发一个安全有效的递送平台。

强大的体外转录(IVT)mRNA恢复缺陷蛋白功能的潜在临床应用很大程度上依赖于其成功的细胞内传递和瞬时翻译，通过开发一个安全有效的递送平台。本研究开发了一种创新方法(在国际专利申请中)来结合ivt-

结合蛋白质trmrnasreduction domain(PTD)技术，是一个高效的递送平台。

该技术基于PTD技术，可以在细胞内递送各种货物，实现了PTD和IVT-mRNA的成功结合，并通过带移分析和核磁共振波谱进行了评价。此外，ptd

-ivtmrna应用于两种蛋白质疾病模型并进行评估，包括线粒体疾病、致命的婴儿心脑肌病和细胞色素C氧化酶(COX)缺乏(由于SCO2基因突变)和b-地中海。在一名SCO2/cox缺陷患者的原代成纤维细胞中，成功地将CO2的PTD-IVT-mRNA转导并翻译成相应的SCO2蛋白，而将b-珠蛋白的PTD-IVT-mRNA转导并翻译成三名b-地中海贫血患者的骨髓细胞。

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尽管体外转录(IVT)-mRNA是在细胞外产生的，但它保留了介导信息转化为受体细胞蛋白质的能力。IVTmRNA技术的主要优势是mRNA分子的转导不会引起致癌突变，这与逆转录病毒/慢病毒应用的策略不同。原则上，基于ivt-mrna的治疗适用于广泛的急性和慢性疾病，包括那些可以通过蛋白质替代疗法(PRT)、基因组编辑、细胞命运重编程和癌症免疫疗法治愈的疾病。

值得一提的是，基于ivt

——mrna疫苗成为人们关注的焦点，因为全球迫切需要接种新冠肺炎疫情引起的新型冠状病毒冠状病毒。在已开发的方法中，BioNTech/和Moderna IVT-mRNA疫苗是第一批注射到人类志愿者体内的疫苗，并已初步获准紧急使用。与需要更长时间的传统疫苗相比，它们具有显著的优势，例如更快、更容易制造和临床开发。

IVT-mRNA可以通过受体介导的机制转导到真核细胞中，尽管在大多数细胞类型中摄取率极低。此外，IVT-mRNA容易被酶降解，从而影响其在高核糖核酸酶活性液体中的结构和功能稳定性，这是一个非常有趣的问题。然而，已经发现IVT-mRNA的半衰期和翻译速率可以通过化学和结构修饰提高mRNA的翻译效率来潜在地控制。

这些修改包括但不限于以下内容：(1)添加抗逆转帽类似物(ARCAs)；(2)修饰的核苷，如5mC(5-甲基胞嘧啶)和j(假尿苷)；(3)IVT-mRNA 3’端的聚腺苷酸化；(4)富含取代腺苷酸/尿苷酸的元素(富含金的元素，AREs如小鼠b-球蛋白基因的5端。

人a-球蛋白或b-球蛋白基因的UTR和3’UTR；(5)在5' UTR有一个强科萨克序列开始翻译。

IVT-mRNA的细胞内递送可以通过许多方法介导，包括细胞膜破坏(通过电穿孔或基因枪)，这导致高比例的死亡细胞，尽管正在努力提高安全性和有效性。此外，IVT-mRNA递送可以通过各种粒子(NP)介导的递送系统来介导。后者包括具有阳离子表面电荷的脂肪族和聚合物基体系，这是与带负电荷的mRNA分子络合的主要特征。然而，由于表面电荷、胶体不稳定、血清稳定性差和清除速度快都起着重要作用，因此仍有必要取代IVT-mRNA递送系统。

CO2PTD-IVT-mRNA转导CO2效率原代成纤维细胞SCO2活性组织化学检测

图像来源：

在本研究中，作者试图设计一种新的ivt-mrna与蛋白质转导域(PTDs)的偶联反应，以实现一种替代的、有效的和可能更安全的方法将ivt-mRNA与PTDS结合。

mrna被转移到培养的人细胞系中。PTD技术中使用的短肽可以穿透几乎所有细胞膜，携带细胞内的各种物品，从小分子和小干扰rna (sirna)到大分子(蛋白质、rna、质粒DNA、NPs)，转导效率相对较高，细胞毒性较低。

本研究的主要目的是设计一种构建和开发新的PTD-IVT-mRNA平台的方法，该平台可以有效地将IVT-mRNA分别转移到人成纤维细胞和Sco2和b-珠蛋白缺乏的造血细胞中。该平台解决了ivt-mrna的稳定性、转导和翻译问题，并允许通过其相应转导的ivt-mrna的有效翻译瞬时产生感兴趣的蛋白质。总之，该平台为高效PRT提供了合适的途径，适用于各种单基因/代谢性疾病。(100yiyao.com)

参考