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“去年，关于120万剂CAR-T高价疗法的新闻传遍了全国。而且这么贵的价格，真的能治好吗？近日，新浪、腾讯、搜狐等多家媒体报道，美国CAR-T之父卡尔朱恩(Carl June)教授在著名期刊《Nature》上发表最新论文，详细介绍了全球首例接受CAR-T治疗的患者比尔路德维希(Bill Ludwig)和第二例接受CAR-T治疗的道格奥尔森(Doug Olson)的治疗结果。在接受了十多年的治疗后，他们两人都没有发现白血病的迹象。卡尔朱恩教授说，现在可以认为CAR-T真的可以治愈白血病。

A.媒体新闻报道[1]

在这项研究中，Carl June的实验室应用Fluidigm CyTOF质谱流动技术对CAR-T细胞的表型和功能进行了深入和长期的跟踪研究。下面，我们将为您详细介绍研究成果。[1]新闻引自：《搜狐网》 https://www.sohu.com/a/520537897_121124565 《腾讯网》 https://new.qq.com/rain/a/20220203A0245700 《新浪财经》 https://CJ . Sina.com.cn/articles/view/5044281310/12 ca 99 FDE 02001 r 4 be

CAR-T疗法，即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，是将患者的T淋巴细胞(具有天然的抗感染和抗癌作用)分离出来，通过基因重编，使T淋巴细胞携带能识别肿瘤细胞抗原的受体，进行体外大规模扩增CAR-T细胞，使其特异性攻击肿瘤细胞，从而快速准确地进行治疗。CAR-T疗法已经在多种癌症中显示出其治疗潜力。然而，对于注射到体内的CAR-T细胞的长期潜力和克隆稳定性却知之甚少。

2022年2月2日，美国宾夕法尼亚大学费城儿童医院的研究人员在《自然》杂志(Nature magazine)在线发表了一篇题为《CD4 car t细胞持续存在的Dece-long白血病任务》[1]的文章，受到广泛关注。利用流式细胞质谱流动技术(CyTOF)和CITE-seq对CAR-T治疗不同阶段患者CAR-T细胞的特征和变化进行了深入分析，首次揭示了长效CAR-T细胞的特征。

使用质谱流程，作者设计了一个由40个标记组成的面板，其中35个标记(表面和细胞内)用于识别T细胞，5个标记用于去除非T细胞。对10年前首次接受CAR-T治疗并获得完全缓解的2例慢性淋巴细胞白血病患者进行了随访。

1.在患者中，CAR-T输注后1.8个月，CD8 CAR-T细胞占29.3%，随后时间点比例下降。注射CAR-T细胞后1.4年，CD4 CAR-T细胞占97.5%；CAR-T细胞输注后3.4至9.3年；CD4 CAR-T细胞占99.6%(图1a-c)。2例患者表现为更多的CAR T细胞扩增延迟，总体上表现出相似的趋势。CD8 CAR-T在最初的时间点是主要的亚组，然后逐渐减少。在注射CAR-T细胞后的7.2年，CD4 CAR-T细胞占97.6%。同时，在患者2中发现CD4-CD8-CAR-T细胞亚群明显。输血后2.5个月和1.6年，CAR-T细胞分别占总CAR-T细胞的33.4%和46.5%。CAR-T细胞在注射后2.8年、4.7年和7.2年分别降至12.9%、8.2%和0.5%(图1b、c)。这种细胞亚群具有独特的细胞表型，表达细胞毒性标记物GZMB、2B4、CD57、CD85j、T-bet和PD-1以及Helios(Helios-T细胞活化和增殖的标记物-编者注[2])。这些特征清楚地将这一亚群与其他类似的细胞毒性CD8 T细胞区分开来(图1b)。基于这种独特的标记，作者将其标记为CD4-CD8- HelioshiCAR-T细胞。在接受CAR-T细胞1.8个月的患者1的样本中，该亚组的比例较低(3.2%)，在接受CAR-T细胞1.4年后，该比例变得更低(小于1%)(图1c)。

图1。CD3 CAR-T细胞在多个时间点的质谱流动分析。a .在不同时间点对患者的CD3 CAR-T细胞进行UMP降维分析，颜色代表取样时间点；b、选定细胞标志物的蛋白表达；UMAP维数减少显示了五个主要CAR-T细胞群的组成，用颜色代表细胞亚群；d .统计分析Ki67在不同细胞中的表达；e . car-t细胞亚群中各标志物表达的热图。CD4 CAR-T细胞高表达Ki67，这是一种增殖表型(图1b)。在两名患者中，Ki67hiCD4 CAR-T细胞稳定出现。1.输血后1.8个月，CAR-T细胞占总CAR-T细胞的15.9%。输入后9.3年CAR-T提高到97.0%。在2名患者中，在CAR-T细胞输注后2.4个月时，Ki67hiCD4 CAR-T细胞占0.2%，在CAR-T细胞输注后7.2年时增加到87.2%(图1b，c)。将CAR CD4 T细胞与CAR- CD4 T细胞进行比较，发现Ki67的表达具有很强的CAR T细胞特异性(图1d)。CD8 CAR-T细胞整体上也表现出增殖趋势，但Ki67的表达一般比CD4 CAR-T细胞低且不稳定(图1d)。并且Ki67hiCD4 T细胞表达不同的标记，包括活化标记CD38、HLA-DR和CD95，转录因子EOMES和TOX，检查点标记CTLA-4、LAG-3和TIGIT，以及记忆标记CD27和CCR7(图1e)。