Nature：MICL调控中性粒细胞NET形成的机制——为自身免疫疾病治疗提供新思路

研究人员利用Micl-/-小鼠构建了类风湿性关节炎的CAIA（collagen antibody-induced arthritis）模型，Micl敲除小鼠表现出了增强以及非缓解的关节炎表型。研究人员取野生小鼠疾病进展最明显的、造模第7天的小鼠关节组织进行分析。通过流式细胞检测发现，关节组织中浸润的中性粒细胞在Micl-/-小鼠中特异性增多。关节组织中其他细胞类型的数量没有发生改变，另外，骨髓以及血液中中性粒细胞的数量也没有发生改变。这一结果在RA的另一个K/BxN模型中也得到了类似的结果。

为了探究中性粒细胞在RA进展中的作用以及和MICL的关系，研究人员在CAIA模型中应用了anti-Ly6G以清除循环中性粒细胞，发现野生小鼠和Micl-/-小鼠的疾病进展下降到了同一层次，说明Micl敲除引起的RA进展是通过中性粒细胞来实现的。进一步的，研究人员分别从WT以及Micl-/-小鼠的骨髓中分离了中性粒细胞，然后在CAIA模型的第7天将这些中性粒细胞分别移植到RA模型小鼠中，研究人员观察到来自Micl-/-小鼠的中性粒细胞加重了关节炎症。这一结果更加证明了Micl-/-小鼠中中性粒细胞在RA进展中发挥了关键作用。

接下来，研究人员发现Micl-/-小鼠来源的中性粒细胞在尿酸钠（monosodium urate, MSU）或者A.fumigatus hyphae刺激下ROS水平提高，由于NET的形成与ROS水平相关，研究人员检测发现Micl缺失导致NET形成也相应增强。NADPH氧化酶抑制剂DPI（diphenyleneiodonium chloride）抑制了NET的形成，说明Micl缺失引起的NET形成依赖于NADPH氧化酶的活性。除了ROS之外，NET的形成也需要组蛋白的瓜氨酸化修饰，这种修饰依赖于PAD4蛋白的功能。而PAD4抑制剂能够在体外实验中抑制NET的形成，体内实验也显示PAD4抑制剂导致Micl-/-小鼠关节中NET的数量明显减少，但并没有影响关节中中性粒细胞的浸润。

研究人员之前的研究已经发现MICL的单克隆抗体能够加剧野生小鼠CAIA模型的病理程度，类似于Micl-/-小鼠的表型。体外实验也显示，MICL的单抗在中性粒细胞中引起了MSU介导的ROS产生增加。另外，MICL单抗对CAIA模型小鼠病理的刺激作用能够被PAD4抑制剂所抑制。这在RA的其他动物模型如CIA（collagen-induced arthritis）中得到了验证。研究人员进一步检测发现，人体MICL抗体能够促进中性粒细胞的活化以及NET的形成。来自RA病人的血清同样能够促进ROS的产生，说明RA病人血清中含有的MICL抗体抑制了MICL的功能，促进了中性粒细胞的活化以及NET的形成。

于是，研究人员进一步检测了RA病人血清中MICL抗体水平和RA病理程度的关系，发现RA病人中MICL抗体的整体水平比对照组高。另外，在与中性粒细胞NET相关的疾病如系统性红斑狼疮和的病人血清中，MICL的抗体水平也同样比正常人高，说明MICL被抑制后，中性粒细胞的活化与这些免疫疾病的进展密切相关。

最后，研究人员发现MICL是一个PRR受体，能够识别NET中的基因组DNA，且这种识别作用能够被MICL的抗体打断。

模式图（Credit:Nature）

综上，本研究发现受体MICL能够调控自免疫疾病中中性粒细胞的活化，一些自免疫疾病病人体内产生过多的MICL抗体，抑制了MICL的功能，导致中性粒细胞持续活化，打破了机体的免疫平衡。本研究确认了自身免疫疾病中免疫平衡维持的关键分子机制，为相关疾病的治疗提供了新的思路和靶点。