JITC:南京大学团队整合两种免疫疗法 重建肿瘤微环境！

免疫抑制肿瘤微环境是免疫治疗长期面临的问题。

在这种肿瘤微环境中，免疫细胞浸润较少，免疫检查点分子的表达使T淋巴细胞耗竭，导致其对细胞的杀伤能力减弱。

科学家已经把目光投向溶瘤病毒。研究表明，溶瘤病毒治疗可以增加肿瘤特异性效应和记忆性T细胞攻击细胞。因此，溶瘤病毒疗法也被认为是一种免疫疗法。

尽管溶瘤病毒疗法早在2015年就被正式批准用于治疗转移瘤，但溶瘤病毒疗法的临床表现并不令人满意。其根本原因是肿瘤的免疫抑制微环境(TME)是主要的限制因素。

近日，南京大学魏教授带领的研究团队在《癌症免疫治疗杂志》发表重要研究成果，巧妙地解决了上述问题。

他们构建了重组表达免疫抑制分子TIGIT单链抗体的工程溶瘤病毒，证明了这种重组溶瘤病毒可以重建肿瘤微环境，将肿瘤微环境由“冷”变“热”，诱导有效的抗肿瘤免疫。此外，如果与PD-1抑制剂或LAG-3抑制剂联用，可产生更好的疗效，促进消退。

这为提高免疫检查点疗法和溶瘤病毒的效果开辟了新思路。

众所周知，溶瘤病毒不仅可以直接靶向肿瘤细胞，还可以增加抗原释放，激活免疫细胞，诱导全身肿瘤免疫反应。修饰后的溶瘤病毒还能表达激活免疫反应的特定蛋白，如细胞因子和免疫检查点抗体，有助于抗肿瘤免疫，准确地说是对细胞的“多重打击”。

如前所述，在实体肿瘤的治疗中，修饰的溶瘤病毒的效果并没有达到预期。实体瘤的免疫抑制肿瘤微环境导致溶瘤病毒收集的免疫细胞中免疫检查点分子高表达，多为无活性，对肿瘤细胞的攻击作用确实有限，无法杀死。

为了克服免疫抑制的肿瘤微环境，研究人员开始尝试将溶瘤病毒疗法与免疫检查点疗法相结合，看看联合疗法能否激活免疫系统，产生更好的抗肿瘤效果。

已经证实，TIGIT抑制剂显著提高了重组表达PD-1单链抗体的溶瘤HSV-1病毒的抗肿瘤疗效[4]。然而，免疫检查点分子是一个“大家庭”，除了PD-1和CTLA-4之外，还包括TIGIT、TIM-3和LAG-3。既然有了靶向PD-1的方法，能否利用溶瘤病毒的工具靶向其他免疫检查点分子，提高免疫细胞的抗肿瘤效果？如果结合免疫检查点疗法，是否会进一步增强疗效，根除？

魏团队首先从溶瘤病毒的转化入手，获得了能够表达TIGIT单链抗体的对照病毒VV-Control和重组溶瘤病毒VV-ScFv-TIGIT。

为了评价VV-scFV-TIGIT的抗肿瘤作用，研究人员使用了小鼠结肠癌CT26模型。瘤内注射VV-scFV-TIGIT后，与对照组相比，小鼠体积明显缩小，荷瘤小鼠生存期明显延长。皮下接种小鼠结肠癌MC38模型、4T1模型和H22模型也观察到这种现象。

魏团队进一步分析了CT26肿瘤中免疫细胞的浸润情况。VV-scFV-TIGIT治疗后，淋巴细胞浸润增加，CD4和CD8 -T细胞比例明显升高。不仅如此，致死性CD107A CD8 -T淋巴细胞比例也有所增加。

总之，VV-scFV-TIGIT不仅招募了更多的免疫细胞，还增强了这些T淋巴细胞的杀伤能力。

CT26是一种免疫原性较高的肿瘤模型，VV-scFV-TIGIT对其有较理想的疗效。那么，VV-scFV-TIGIT能否在T淋巴细胞浸润更少、肿瘤微环境抑制更强的“冷”——H22腹水模型中发挥其神奇力量呢？

令人高兴的是，在H22腹水肿瘤模型中，腹腔注射VV-scFV-TIGIT后，肿瘤细胞比例下降，淋巴细胞浸润增加。此外，浸润免疫细胞的杀伤力也增加，荷瘤小鼠的存活率也增加。

VV-scFV-TIGIT对CT26结肠癌和H22肿瘤均有较好的抗肿瘤作用。它不仅可以招募T淋巴细胞，还可以激活这些细胞来帮助对抗免疫。

那么，VV-scFV-TIGIT在长期肿瘤特异性免疫记忆和系统免疫方面的表现如何呢？

腹腔注射H22肿瘤细胞的荷瘤小鼠用VV-scFV-TIGIT治疗，待肿瘤消退后。魏团队两次将H22肿瘤接种到腹膜内。H22肿瘤细胞第二次腹腔接种30天后，小鼠皮下接种H22肿瘤细胞，30天后小鼠接种MC38肿瘤细胞。将先前治愈的小鼠再次接种H22肿瘤。无论皮下接种还是腹腔接种，肿瘤均消失。然而，皮下接种的MC38没有受到抑制，继续生长。

流式细胞仪分析显示，在治愈的H22荷瘤小鼠脾脏中，CD8 -T细胞比例升高，初始CD8 -T细胞比例降低，而中心记忆(CD62L-CD44)和效应记忆(CD62L-CD44)中CD8 -T细胞亚群比例升高。这证明VV-scFV-TIGIT诱导长期特异性免疫记忆。

有了“时间”的作用，“空间”的作用呢？

魏团队将H22肿瘤细胞同时接种到小鼠腹腔和皮下，腹腔内只注射VV-scFV-TIGIT。令人惊讶的是，不仅腹腔内的H22肿瘤全部消失，皮下植入的H22也几乎完全消失。

这意味着一旦给药，全身生效。荷瘤小鼠接受VV-scFV-TIGIT治疗后，具有有效的全身抗肿瘤免疫，可借助全身免疫反应杀死远端肿瘤。在太空中，VV-scFV-TIGIT也有很好的治疗效果。

VV-scFV-TIGIT治疗后，肿瘤中表达免疫检查点分子PD-1或LAG-3的CD8 -T细胞数量较对照组增加。靶向TIGIT，可能还有其他免疫检查点分子，已经成为抗治疗的“拦路虎”。为了达到更好的治疗效果，研究人员将目光投向了免疫检查点抑制剂的联合治疗之路。

TCGA数据库分析显示，在乳腺癌、结肠癌等癌症中，TIGIT分子的高表达通常伴随着另外两种免疫检查点分子——PD-1和LAG-3的高表达。

因此，研究人员将VV-scFV-TIGIT瘤内注射和PD-1抑制剂腹腔注射到CT26荷瘤小鼠体内。与单独两种治疗相比，联合治疗显著缩小了体积，增加了部分缓解和完全缓解的小鼠数量，使荷瘤小鼠寿命延长。

在用VV-scFV-TIGIT和LAG-3抑制剂治疗的CT26荷瘤小鼠中也观察到这种现象。这表明PD-1抑制剂或LAG-3抑制剂的联合应用可以进一步提高VV-scFv-TIGIT的抗效力。(100yiyao.com)