SCI IMMUNOL:一种高亲和力的人类TCR样抗体检测乳糜泻谷卵白肽

对肽-次要组织相容性复合体(pMHC)具备特同性的抗体(Abs)，即所谓的T细胞受体(TCR)样抗体，已胜利用于检测和量化细胞上的肽呈递，几项研讨标明了分歧形式的医治后劲，包含克制致病性T细胞和杀死抗原呈递细胞(APC)的机制。研讨者曾经天生了TCR样抗体，这些抗体对波及乳糜泻(CeD)的pMHC复合物具备特同性。

图片起源：https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abg4925

CeD是一种小肠炎症性本身免疫病，由对膳食麸质卵白的免疫反馈惹起，这种疾病是由CD4+T细胞驱动的，这些细胞在疾病相关的人类白细胞抗原(HLA)-DQ分子HLA-DQ2.5(DQA1*05/DQB1*02)、HLA-DQ2.2(DQA1*02:01/DQB1*02:02)和HLA-DQ8(DQA1*03/DQB1*03:02)的配景下辨认脱酰胺谷卵白肽，在这些HLA变体中HLA-DQ2.5与CeD的相关性最强，在年夜约90%的CeD患者中检测到，而在安康对照中检测到的比例约为20%。该研讨报道了在HLA-DQ2.5:DQ2.5-glia-α1a上选择的Abs的发生和使用，发现肠道浆细胞(PC)是CeD患者发炎的小肠中最丰厚的麸质肽呈递细胞，它们同时表白HLA-II类和T细胞共刺激分子，并描写了与DQ2.5-glia-α2复合的HLA-DQ2.5特同性人类TCR样抗体的发生和亲和力。

HLA-DQ2.5:DQ2.5-glia-α2特同性抗体的拆散和表征 图片起源：https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abg4925

为了天生与CeD表位DQ2.5-glia-α2复合的HLA-DQ2.5特同性人抗体，将人童稚单链片断可变(scFv)噬菌体展现库与可溶性重组pMHC进行淘选，然后，将将噬菌粒的选择输入从新格局化为用于可溶性scFv表白的载体，并通过ELISA挑选了70个用于靶标联合的单克隆；共49个单克隆优先联合靶点，序列阐发鉴定出14个共同序列。为了表征选定的scFv并选择一个先导克隆，研讨者在年夜肠杆菌中表白了一切共同的克隆，并在ELISA中间接比拟了周质部门的靶标联合；同时，使用纯化的scFv进行了先导外表等离子体共振(SPR)丈量，依据反馈性特征和表观亲和力，选择了一个先导克隆称为206。当从新格局化为全长人免疫球卵白G1 (hIgG1)时，206保留了与HLA-DQ2.5:DQ2.5-glia-α2的联合，虽然联合很弱；未察看到与高度类似的表位HLA-DQ2.5:DQ2.5-glia-ω2的联合；为了精确确定单体亲和力，构建了206的Fab版本，通过SPR阐发，以较高的偏差率预算了其与KD240±20nM的单体亲和力(2.4×10 1s 1)。

先导物的生物物理特征 图片起源：https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abg4925

该研讨通过SPR进行联合阐发，并依据它们的解离率对六个Ab进行排名，用表示出最低解离率的克隆3.C11测试的一切克隆都察看到解离率显著下降；与改善的（较低）解离率一致，3.C11与KD88±8pM的亲和力显著改善，与亲本克隆相比改善了2700倍；3.C11随后表白为全长hIgG1并在ELISA中测试特同性联合发现，3.C11仅与HLA-DQ2.5:DQ2.5-glia-α2联合。，是以，高亲和力抗体坚持了母克隆的高特同性。研讨者接上去通过使用纳米级差示扫描荧光法(nanoDSF)确定它们的溶化温度来评价一切Fab片断的热稳定性发现，高亲和力变体的溶化温度比它们的母克隆略低，先导克隆3.C11具备最高的热稳定性，因为其无利的生物物理个性，3.C11作为进一步表征的次要候选物。

C11与HLA-DQ2.5:DQ2.5-glia-α2的TCR样联合形式 图片起源：https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abg4925

为相识3.C11特同性和亲和力的分子根底，该研讨得到了3.C11Fab片断和HLA-DQ2.5:DQ2.5-glia-α2的晶体复合物，构造分辩率为2.4- ，该构造显示3.C11Fab以“TCR 样”对接形式联合HLA-DQ2.5:DQ2.5-glia-α2。为了表征3.C11的TCR样特征，将3.C11三元复合物的构造与S16 TCR的构造进行了比拟，3.C11Fab将肽与一切CDR环接合，VL和VH质心地位与肽轴之间的角度为57°，是以，3.C11的VL和VH域别离盘踞了经典TCR Vα和Vβ域联合位点的地位。3.C11在HLA-DQ2.5:DQ2.5-glia-α2上的整体定位与S16三元复合物中的TCR类似，虽然3.C11VL和VH质心地位向HLA- DQ2.5α链螺旋别离比S16Vα和Vβ质心地位高3.7和6.1 ，CDR环绝对于pMHC的规划和3.C11的脚印也年夜致相似于S16TCR的规划，是以3.C11和S16共享年夜量pMHC打仗残基。3.C11使用一切六个CDR环与pMHC互相作用，打仗肽焦点的九个氨基酸中的七个，发现这一特征标明肽具备高特同性；3.C11还与MHCα 和β链的几个残基联合，特殊是IGHV1-69的强选择部门可以通过该种系片断的疏水性CDRH2与MHCα链造成强界面来解释。