Nature：生命的“化学伪装”——RNA N-糖基化，一种被忽视的免疫调控艺术

揭开 伪装 ：当RNA脱下糖衣

要探究这件 糖衣 的功能，最直接的方法莫过于将它 脱掉 ，然后观察会发生什么。研究人员正是从这个简单的想法入手，设计了他们的第一个关键实验。

他们首先从人类细胞中分离出小分子RNA组分，这些组分富含我们感兴趣的glycoRNA。然后，他们请来了一位 分子裁缝 一种名为PNGase F的酶。这种酶非常专一，它的工作就是精准地剪切掉附着在分子上的N-糖链，而不会损伤RNA本身。经过PNGase F处理后，原本穿着 糖衣 的glycoRNA就变成了 裸露 的RNA。

接下来，就是见证奇迹的时刻。研究人员将这些处理过和未处理过的RNA，分别引入到巨噬细胞（macrophages）中。巨噬细胞是免疫系统的 前线巡逻兵 ，时刻准备着对潜在的危险信号发出警报。

结果令人震撼。未经处理的、带有完整糖衣的glycoRNA进入巨噬细胞后，一切风平浪静，巨噬细胞表现得十分 淡定 。然而，当那些被PNGase F 脱去 糖衣的RNA被引入时，巨噬细胞瞬间 警铃大作 。它们迅速启动了强烈的先天免疫反应，大量生产并释放出一种名为 -干扰素（interferon- , IFN- ）的警报信号。数据显示，在100ng的RNA刺激下，被PNGase F处理过的RNA诱导的IFN- 浓度飙升至约350 pg/ml，而未经处理的RNA所诱导的水平则几乎为零，与空白对照无异。

为了确认这个反应确实是由RNA本身而非其他杂质引起的，研究人员进行了一个重要的对照实验。他们在用PNGase F处理RNA后，再加入一种RNA酶（RNase）混合物，将RNA分子彻底降解。结果，免疫反应完全消失了。这清晰地表明，正是 裸露 的RNA分子本身，成为了点燃免疫系统怒火的 火种 。

这个发现的重要性不止于实验室的细胞模型。我们的血液中也循环着各种细胞释放的RNA分子。研究人员因此将目光投向了更具生理相关性的样本 人类和小鼠的血清。他们成功地从血清中分离出了glycoRNA，并重复了上述实验。结果再次印证了他们的发现：来自血清的glycoRNA在正常状态下是免疫惰性的，可一旦用PNGase F脱去其糖衣，它们立刻摇身一变，成为强大的免疫刺激物，不仅能诱导IFN- ，还能促使巨噬细胞产生肿瘤因子（TNF）和白细胞介素-6（IL-6）等多种炎症因子。

这一系列实验有力地揭示了N-糖基化的第一个核心功能：它是一层保护性的 伪装 ，一层 糖盾 ，有效地屏蔽了自身RNA的内在免疫刺激性，从而阻止了免疫系统对 自己人 发起不必要的攻击。

死亡的 艺术 ：如何安静地 打扫战场 ？

每天，我们体内都有数十亿的细胞遵循着程序性死亡（apoptosis）的指令，走向生命的终点。这个过程必须被精确调控，死亡细胞的 尸体 需要被免疫细胞（主要是巨噬细胞）迅速而 安静 地清除。这个过程被称为 胞葬作用 （efferocytosis）。这里的 安静 至关重要，意味着清除过程不能引发炎症，否则我们的身体将长期处于慢性炎症状态，后果不堪设想。

这就带来了一个有趣的悖论。研究已经知道，细胞表面也存在着glycoRNA。当一个细胞凋亡时，它表面的glycoRNA会随着细胞碎片一同被巨噬细胞吞噬。吞噬后，这些RNA将进入巨噬细胞的内涵体（endosome），而那里恰恰是RNA免疫感应器 Toll样受体（Toll-like receptors, TLRs） 的 驻扎地 。那么，为什么这个过程没有触发免疫警报呢？难道是glycoRNA的 糖衣 再次发挥了关键作用？

为了验证这个猜想，研究人员设计了一个模拟体内胞葬作用的巧妙实验。他们用药物诱导HeLa细胞凋亡，然后将这些凋亡细胞分为几组。一组作为对照，另一组则用PNGase F处理，脱去其细胞表面的N-糖链。随后，他们将这些凋亡细胞 喂 给巨噬细胞。

实验结果完美地支持了他们的假说。当巨噬细胞吞噬正常的凋亡细胞时，一切如常，没有观察到明显的免疫反应，完美诠释了 安静 的清理过程。然而，当巨噬细胞吞噬的是那些被脱去 糖衣 的凋亡细胞时，一场剧烈的免疫风暴被掀起。巨噬细胞产生了大量的IFN- ，其水平与之前实验中直接转染 裸露 RNA所引发的反应相当。例如，在巨噬细胞与凋亡细胞比例为1:8的条件下，经PNGase F处理的凋亡细胞诱导的IFN- 水平从几乎为零激增至超过300 pg/ml。

研究人员还通过抑制剂（如细胞松弛素D）阻断了巨噬细胞的吞噬功能，发现即便存在着被处理过的凋亡细胞，免疫反应也无法被触发。这说明，只有在细胞被真实 吞下 ，其表面的 裸露 RNA进入到细胞内部的感应器面前时，警报才会被拉响。

这些结果揭示了RNA N-糖基化的第二个至关重要的生理功能。它不仅仅是保护游离的RNA分子，更是确保了细胞程序性死亡这一基本生命过程的 免疫沉默 。正是这层 隐身斗篷 ，使得每天在我们体内上演的 生死轮回 大戏能够和平落幕，维持着组织的稳态与健康。

揪出 内鬼 ：原来是acp U在 作祟

既然我们知道了 糖衣 是伪装，那么它到底在伪装什么？换句话说，当糖衣被脱去后，RNA上暴露出来的那个让免疫系统 勃然大怒 的 内鬼 究竟是谁？

研究人员将焦点锁定在一个名为3-(3-氨基-3-羧丙基)尿苷（acp U）的分子上。这是一种高度修饰化的尿苷（RNA的基本组成部分之一），此前的研究已经证实，它正是N-糖链连接到RNA上的那个 锚点 。研究人员大胆推测：也许acp U本身就是那个免疫刺激信号，而N-糖链的功能就是像一个 安全帽 一样，把它严密地盖住。

为了验证这个 嫌疑犯 ，研究人员双管齐下，同时采用了遗传学和化学合成两种策略。

在遗传学方面，他们利用了DTWD2基因敲除（KO）的细胞系。DTWD2是合成acp U所必需的一种关键酶。因此，来自这些KO细胞的RNA从源头上就缺少acp U这个结构。研究人员的逻辑是：如果acp U真的是 内鬼 ，那么即便用PNGase F处理DTWD2 KO细胞的RNA（为了排除其他潜在糖基化的影响），它也应该不会引发免疫反应。

实验结果与预测完全一致。当研究人员将来自DTWD2 KO细胞的小分子RNA转染进巨噬细胞时，无论是否经过PNGase F处理，巨噬细胞都毫无反应。同样，诱导DTWD2 KO细胞凋亡后，再用PNGase F处理并让巨噬细胞吞噬，也完全无法激发炎症。这一结果有力地将嫌疑范围缩小到了acp U身上。

虽然遗传学证据很有说服力，但要 定罪 还需要更直接的证据。为此，研究人员转向了化学合成。他们人工合成了几段很短的RNA链。其中一些含有普通的尿苷（U），而另一些则在同样的位置上被替换成了acp U。

当这些合成的RNA被用于刺激巨噬细胞时，决定性的证据出现了。含有普通尿苷的RNA链是完全惰性的，而含有acp U的RNA链则表现出极强的免疫刺激活性。例如，在250 nM的浓度下，acp U修饰的RNA能诱导THP-1巨噬细胞产生超过1000 pg/ml的IL-6，而未经修饰的RNA则几乎没有作用。这相当于抓到了 犯罪现场的直接证据 ，证实了acp U本身就是一个强效的内源性免疫刺激分子。

更有趣的是，研究人员还探索了这顶 安全帽 的作用机制。acp U分子上有一个关键的化学基团 羧基。研究人员猜想，也许正是这个羧基在 惹事 。于是，他们通过化学方法将这个羧基 封 住（例如，将其转化为一个酰胺基团），或者在acp U上只连接一个N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）分子 这是N-糖链的第一个糖单元。结果发现，无论是哪种 封盖 ，acp U的免疫刺激活性都消失了。这表明，N-糖链的屏蔽作用是何等精确，它通过覆盖acp U上关键的化学基团，实现了完美的 消音 效果。

双重 警报 ：TLR3与TLR7的协同 盘问

既然 内鬼 acp U已经被揪出，那么最后一个问题是：免疫系统的哪些 哨兵 或 感应器 负责识别并 盘问 这个暴露的acp U？

在哺乳动物细胞中，内涵体（endosome）内的Toll样受体家族是感知核酸（DNA和RNA）的主力军。其中，TLR3主要识别双链RNA（dsRNA），而TLR7则主要负责识别单链RNA（ssRNA）。考虑到天然的小分子RNA结构复杂，可能同时包含单链和双链区域，研究人员推测TLR3和TLR7可能都参与了对 裸露 acp U-RNA的识别。

为了验证这一点，他们利用了基因敲除小鼠，这些小鼠分别缺失了TLR3、TLR7，或者它们下游的关键信号转接蛋白（TRIF对应TLR3，MyD88对应TLR7）。他们从这些小鼠体内分离出巨噬细胞，并用被PNGase F处理过的、 裸露 的自身小RNA进行刺激。

实验结果再次带来了惊喜。在正常的野生型（WT）巨噬细胞中， 裸露 RNA引发了强烈的IFN- 反应。然而，在TLR3敲除的细胞和TLR7敲除的细胞中，这个反应都受到了显著的抑制。例如，在野生型巨噬细胞中，PNGase F处理后的小RNA诱导了约250 pg/ml的IFN- ，而在TLR3 KO和TLR7 KO的巨噬细胞中，这一数值均下降到了100 pg/ml以下。

这个结果表明，对acp U-RNA的识别并非 非此即彼 的简单模式，而是需要TLR3和TLR7这两个感应器的协同作用才能达到最佳效果。这可能是免疫系统的一种 双重验证 机制：一个RNA分子需要同时满足两个不同感应器的识别条件，才能被判定为足够危险的信号，从而触发最高级别的警报。这种协同作用确保了免疫反应的精确性和适度性，避免了对微不足道或模糊信号的过度反应。这为我们理解先天免疫信号的整合与调控，提供了新的见解。

当 隐身术 失灵：自身免疫的风暴前夕？

这项研究为我们描绘了一幅关于RNA N-糖基化的完整功能图景。它揭示了生命如何通过一种巧妙的化学修饰，在维持免疫平衡这一核心任务中，展现出令人惊叹的智慧。N-糖链作为acp U的 监护人 ，确保了自身RNA在循环系统和细胞程序性死亡过程中的 豁免权 。

然而，故事的结尾往往是新故事的开始。这项基础研究的发现，立刻将我们的思绪引向了临床医学，特别是自身免疫性疾病的领域。

系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）是一种典型的自身免疫病，其核心特征之一就是免疫系统错误地产生了针对自身核酸（包括RNA和DNA）的抗体，并攻击自身组织。几十年来，人们一直在探寻导致这种 自我识别 崩溃的根本原因。这项新研究提出了一种极具吸引力的可能性：会不会是glycoRNA的 隐身术 失灵了？

我们可以大胆设想几种可能的情景：在SLE患者体内，或许是合成N-糖链或将其连接到RNA上的酶系统出现了缺陷，导致大量 裸露 的、具有免疫刺激性的acp U-RNA在体内循环。又或者，某些环境因素（如病毒感染）破坏了这层 糖衣 ，暴露了acp U。这些暴露的acp U-RNA持续刺激免疫系统，诱导慢性炎症，并可能作为抗原，驱动身体产生针对acp U或其周围RNA结构的自身抗体。一旦形成这种恶性循环，免疫系统的攻击将不断升级，最终导致系统性的组织损伤。

在这项研究中，研究人员也初步探索了这一方向。他们检测了少量SLE患者血清中的glycoRNA，发现其图谱呈现出高度的异质性。虽然由于样本量限制，未能得出学上明确的结论，但这无疑是一个充满希望的开端，为未来的研究指明了方向。

这项发现为我们提供了一个全新的视角来审视自身免疫。它告诉我们，免疫的平衡可能不仅仅取决于识别序列或高级结构，还可能取决于像糖基化这样精细的化学修饰。未来，通过检测循环血液中 裸露 acp U-RNA的水平，或针对acp U的抗体，或许可以开发出SLE等疾病的新型生物标志物。更令人期待的是，如果我们能够深入理解并调控RNA的糖基化过程，比如开发出能够稳定或修复这层 糖衣 的药物，甚至可能为治疗这些棘手的自身免疫性疾病，带来革命性的突破。

从一个基础的分子修饰，到细胞的生死平衡，再到人类的重大疾病，这项研究完美地诠释了基础科学的魅力。它不仅解答了一个 为什么 的问题，更开启了通往无数个 怎么办 的崭新大门。生命的 隐身术 已被揭示，而如何利用这一知识去守护生命的和平，将是研究人员下一步探索的壮丽篇章。

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