《自然》：欧洲根据已知基因序列合成新冠病毒，助力疫苗开发

当地时间5月4日，国际顶级学术期刊《自然》（Nature）以“加快评审文章”(Accelerated Article Preview)形式在线发表了来自瑞士、德国、俄罗斯多家科研机构的一项研究“Rapid reconstruction of SARS-CoV-2 using a synthetic genomics platform”。团队在已知新冠病毒基因序列的基础上，首次在试验中通过反向学手段在菌中快速构建出了活的新冠病毒。论文中提到，反向学被认为是一种不可或缺的工具，它彻底改变了我们对病毒发病机制和疫苗开发的认识。

论文通讯作者为瑞士伯尔尼大学病毒学与研究所的Volker Thiel以及该校兽医学院传染病与病理生物学学系的Joerg Jores。该研究工作早在当地时间2月21日在线发表于预印本网站BioRxiv，当时未经同行评议。

值得注意的是，这是一项根据已知病毒基因组进行病毒重建的工作，该成果与此前的谣言之一“新冠病毒是人工合成的” 无关，本研究中实验室中构建的新冠病毒是在疫情暴发后，根据已经公布的病毒基因组序列进行的病毒重建研究。

研究团队指出，化学合成新冠病毒，尤其在新暴发病毒尚未被成功分离出之前，可以帮助科学家尽快向卫生部门和实验室提供传染性病毒毒株，还可以对单个基因进行修饰和功能表征，从而争取时间对疫情暴发做出快速反应。

大型的RNA病毒基因组，如冠状病毒基因组，由于基因组较大且不稳定，很难在大肠杆菌宿主中克隆和操作。研究团队此次报道了一个基于的合成平台，用于多种RNA病毒的基因重建，包括冠状病毒科、黄病毒科和副粘病毒科的成员。

研究团队首先在其他RNA病毒（如鼠肝炎病毒MHV）中检验了基于酵母的合成平台的准确度，团队测试了鼠肝炎病毒A59株中含有绿色荧光蛋白（MHV GFP）的基因克隆能力，结果表明测试的克隆中正确组装了MHV基因组的YAC占90％，这表明病毒在中的组装效率很高。

也正是利用该平台，研究人员在拿到合成DNA片段后一周内，对新冠病毒进行了工程改造和复活。

具体来看，研究团队将病毒基因组分成12个片段，大小在0.5kbp-3.4kbp。同时，为了便于血清学和在细胞培养时追踪，研究团队将合成新冠病毒设计成可以表达GFP（绿色荧光蛋白）。因此，研究团队又将片段11分成3个包含GFP序列的子片段，GFP序列被插入ORF7a（开放阅读框，ORF)中，从而总计有14个片段。

研究团队让试剂公司化学合成上述14个DNA片段，1月14日下订单，2月4日拿到其中的12个片段。片段5和7在大肠杆菌中的克隆出现一些问题未能完成。不过，研究团队恰好同时获得了慕尼黑一位患者的新冠病毒样本（SARS-CoV-2/München1.1/2020/929），他们决定利用RT-PCR扩增获得片段5和片段7。

利用TAR克隆，对于所有6种新冠病毒构建体，研究人员都获得了正确组装的分子克隆。随后，利用转化偶联重组技术 (TAR)，用菌的同源重组系统依据末端重复的序列，将这些DNA序列拼到一起。获得完整的病毒序列后，用T7 RNA聚合酶将这一DNA序列转录为病毒RNA，将该RNA用电穿孔技术导入到VeroE6（猴肾细胞）中，使得细胞被感染，培养这些细胞的上清液（含释放出的病毒颗粒）注入到别的培养基中，可以感染别的细胞。

研究团队进而表示，“我们能在获取病毒的合成DNA片段后仅一周的时间内，对最近流行的新冠病毒的化学合成克隆进行工程改造和复活。”病毒的重组有很高的效率和准确度，通常情况下，超过90%的克隆是正确的。

值得注意的是，除新冠病毒外，研究团队还报道了利用该技术合成构建MHV（鼠肝炎病毒，一种冠状病毒）和MERS-Cov等，HCov-229E和Zika病毒的构建仍在实验进行中。(100yiyao.com）