取代吗啡医治痛苦悲伤的依赖!Science子刊：基于CRISPR和锌指卵白的基因医治技术缓解慢性痛苦悲伤

慢性痛苦悲伤是指继续一个月以上的痛苦悲伤，骨枢纽关头炎、颈痛、腰痛、头痛、癌痛等均是罕见的慢性痛苦悲伤。今朝，我国至多有一亿以上的慢性痛苦悲伤患者。因为它的发生发火给患者带来的苦楚，会使人呈现就寝错乱、缺乏食欲、精力解体等效果，这重大影响生存质量，是以也有人把慢性痛苦悲伤比喻为一种不死的癌症。今朝医治慢性痛苦悲伤的次要办法是服用阿片类药物（如吗啡、杜冷丁），然则阿片类药物具备重大的，恒久服用会招致耐受和依赖。

已有研讨标明，电压门控钠离子通道（Nav）与痛苦悲伤感觉的产生相关，并且Nav1.7能够在慢性痛苦悲伤中起中间作用。是以（GSK）、（Pfizer）、渤健（Biogen）和基因泰克（Genentech）等公司始终在测验考试使用小分子药物和抗体来阻断Nav1.7，但这些疗法会与体内构造类似的其他钠通道互相作用，发生麻痹等不良的反作用，均未取得胜利。

加利福尼亚年夜学圣地亚哥分校颁发在《Science Translational Medicine》杂志上题为“Long-lasting analgesia via targeted in situ repression of NaV1.7 in mice”的研讨，应用dCas9卵白和锌指卵白靶向定位Nav1.7，阻止Nav1.7基因的表白，从而缓解小鼠慢性痛苦悲伤。

为了开辟一款耐久且非成瘾性缓解慢性痛苦悲伤的产物，研讨职员摸索了两种自力的遗传学办法来克制痛苦悲伤在脊柱程度的传达。一种是使用dCas9卵白（不会发生切割，只会在sgRNA的领导下特同性的联合目标位点）完成对NaV1.7的非永恒性基因克制。另一种是使用ZFP锌指卵白（辨认并修饰特定DNA序列）进行表观调控NaV1.7的表白。并将两种卵白包装在腺相关病毒（AAV）中，穿越进细胞中。

接上去，研讨职员探求了在三种罕见痛苦悲伤模子中两种克制NaV1.7表白办法的表示。

起首是卡拉胶诱发的炎性痛苦悲伤模子，在小鼠施加卡拉胶24小时后，提取DRG，并通过qPCR确定NaV1.7转录表白的克制。成果发现，打针AAV9-Zinc-Finger-4-KRAB的小鼠NaV1.7克制率达67％，打针AAV9-KRAB-dCas9-dual-gRNA的小鼠NaV1.7克制率达50％，并且还察看到打针AAV9-Zinc-Finger-4-KRAB和AAV9-KRAB-dCas9-dual-gRNA的小鼠中缩爪反馈埋伏期（PWL）显着添加。这阐明小鼠NaV1.7的靶向克制可以下降炎性痛苦悲伤状态下的热痛觉过敏。

第二种模子是化疗法中紫杉醇发生的多发性神经性痛苦悲伤，在第14、16、18和20天对小鼠腹膜内赐与8 mg / kg紫杉醇，然后测试小鼠的触觉异常性痛苦悲伤阈值。成果发现对照组和AAV9-KRAB-dCas9-no-gRNA的小鼠的阈值下降，而AAV9-Zinc-Finger-4-KRAB和、AAV9-KRAB- dCas9-dual-gRNA的阈值添加。这标明原位克制NaV1.7可预防化疗惹起的触觉异常性痛苦悲伤。

第三种模子是BzATP（ATP相似物）诱导的继续性痛苦悲伤，在小鼠鞘内打针30 nmol BzATP后，丈量0.5、1、2、3、6和24小时触觉异常性痛苦悲伤阈值。成果发现打针、AAV9-KRAB-dCas9-dual-gRNA的小鼠中，在30分钟、1小时和3小时的光阴点，触觉异常性痛苦悲伤显明削减。这阐明靶向克制NaV1.7缓解BzATP诱导的继续性痛苦悲伤。

进一步为了确定NaV1.7原位克制对慢性痛苦悲伤是否恒久无效，研讨职员在鞘内打针AAV后第42、84和308天反复了卡拉胶炎性痛苦悲伤模子并测试了热痛觉过敏，察看到在一切三个光阴点，AAV9-Zinc-Finger-4-KRAB的小鼠PWL都有显着改善，这阐明NaV1.7原位克制对炎症性痛苦悲伤具备耐久性。

研讨职员在AAV打针后105天和末了一次紫杉醇打针后85天丈量了小鼠异常性痛苦悲伤阈值。成果发现，与后期成果相比，对照组和AAV9-KRAB-dCas9-no-gRNA的小鼠在第105地利的触觉异常性痛苦悲伤都比第21天添加了，而打针AAV9-Zinc-Finger-4-KRAB和AAV9-KRAB-dCas9-dual-gRNA的小鼠的阈值添加，这标明NaV1.7的原位阻挠对化疗发生的痛苦悲伤具备恒久预防的作用。

末了，为了确定通过ZFP-KRAB和KRAB-dCas9克制NaV1.7表观的潜在反作用，研讨职员进行了一系列毒性和反作用测试，成果发现不会影响小鼠的体重、体平和肌肉张力。并研讨了锌指卵白和CRISPR-dCas9介导的基因缄默对转录调控的全基因组影响，确认了靶向基因调控的CRISPR和锌指办法均具备高度特同性。

总的来说，这种疗法在不敞开其他钠通道的环境下敲低了Nav1.7的表白，小鼠除痛苦悲伤外没有失去任何感觉，也没有表示出其他反作用，这是研讨慢性痛苦悲伤医治办法中又一里程碑式的发现。(100yiyao.com）