卵白质N

卵白质的定点修饰是通过化学反馈对卵白质特定位点进行修饰，从而到达对卵白质改性或对其进行标志等一系列目标。卵白质的定点修饰对反馈前提严厉：反馈需在水相溶液中进行，同时卵白质其它侧链基团不参加反馈。近日，上海交通年夜学特殊研讨员王平课题组与中国迷信院昆明植物研讨所研讨员郑永唐课题组单干，倒退了一种由仿生的邻醌介导对卵白N-端进行选择性修饰的办法，并将其运用于卵白质标志和抗HIV药物研发等畛域。

卵白质的N-端-α胺基相较于赖氨酸的ε胺基有较低的pKa，因而更具备亲核性，是卵白质定点修饰的抱负位点。自然界中，铜胺氧化酶催化酪氨酸的侧链酚基被氧化成邻醌，邻醌可将系统内的一级胺氧化成醛、酮基。受此启迪，科研职员倒退了卵白质仿生转氨化的办法。通过挑选多种邻醌类化合物与模板肽进行反馈，发现邻醌试剂在pH 6.5的缓冲水溶液中具备最高活性，能在2小时内将N-端为甘氨酸的模板肽8转换为醛，随后与乙氧基胺作用发生更稳定的肟产品9，两步总转换率到达91%，而模板肽中的赖氨酸ε胺基在该反馈前提下发生的副反馈低于1%。该氧化前提实用于N-端为精氨酸、亮氨酸，赖氨酸，甲硫氨酸、谷氨酸，天门冬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸和天门冬酰胺等多肽的修饰，均能以高产率得到修饰多肽。

随后，该办法被利用于卵白质目的物泛素及肌红卵白的修饰，均能以70%以上的转化率获得目的肟产品及生物素标志的肌红卵白修饰产品。因为反馈前提对卵白序列中游离的半胱氨酸巯基并不耐受，科研职员进而倒退了光敏维护基战略，即先将卵白质中游离的半胱氨酸与小分子2-硝基胡椒苄溴反馈而当选择性维护，随落后行转胺化反馈，末了通过光摆脱除维护基，即获得目的修饰卵白质。反馈进程中不需额定拆散伎俩，只要通过复杂萃取去除小分子反馈物即可，最年夜限度地维持了卵白质的三级构造。科研职员将该战略利用于含游离半胱氨酸的SUMO2和RNF4卵白质的转胺化。

卵白质趋化因子CCL4是HIV辅助受体CCR5的配体。科研职员应用该战略对CCL4的N-端进行转胺化修饰，疾速获得一系列修饰卵白质29-45。抗HIV-1活性体外试验标明，带修饰卵白质30和31的抗HIV-1活性相较于表白的CCL4活性有显着进步。该试验标明，通过卵白质化学合成与定点修饰联用可以在短光阴内获得年夜量分歧修饰的卵白质，可为抗HIV卵白质类药物的制备提供妙技。(100yiyao.com）