Journal for ImmunoTherapy of Cancer:重组耻垢分枝杆菌提供人巨噬细胞迁徙克制因子(MIF)和IL

巨噬细胞迁徙克制因子(MIF)是一种多效性炎性细胞因子，在包含年夜多半人类癌症在内的多种癌症类型中适度表白，克制MIF旌旗灯号可以复原肿瘤微情况中的抗癌免疫反馈，该研讨旨在开辟一种可能通过诱导抗MIF免疫反馈来克制肿瘤倒退的医治性疫苗。

耻垢分枝杆菌(Smeg)是一种疾速成长的腐生情况分枝杆菌，可以用许多异源基因进行无效转化使其成为抱负的疫苗载体。与卡介苗(BCG)相比，Smeg会被感化细胞吞噬体中的吞噬溶酶体卵白酶迅速毁坏，这可以匆匆进抗原更好地穿插呈递到T细胞中，Smeg还可以更好地诱导树突状细胞的成熟，并可以触发CD8+T细胞介导的免疫反馈，这标明它在诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反馈方面具备劣势，这是癌症免疫医治所必须的。

图片起源：http://dx.doi.org/10.1136/jitc-2021-003180

佐剂白细胞介素7 (IL-7)医治可以惹起多种疫苗模块中抗原特同性效应和影象CD8+T细胞数目的显着添加，包含基于慢病毒或基于DNA的疫苗，特殊是，IL -7可以通过进步活化T细胞的存活率和体内细胞消融活性来加强疫苗诱导的抗肿瘤免疫并进步荷瘤小鼠模子中小鼠的存活率。该研讨开辟了一种重组Smeg疫苗，该疫苗提供了人MIF和IL-7的交融卵白(rSmeg-hMIF-hIL-7)，它可以作为别离通过新型分枝杆菌-年夜肠杆菌穿越载系统统pMyong2成为癌症疫苗的靶抗原和佐剂，以保障在重组Smeg或BCG中递送的异源基因的稳定和加强表白。

表白hMIF-hIL-7交融卵白的重组耻垢分枝杆菌的构建 图片起源：http://dx.doi.org/10.1136/jitc-2021-003180

研讨者使用pMyong2-TOPO载系统统，天生了三种表白人巨噬细胞迁徙克制因子(rSmeg-pMyong2-hMIF)、人IL-7 (rSmeg-pMyong2-hIL-7) 和交融卵白(rSmeg-pMyong2-hMIF-hIL-7) 加强Smeg的抗癌作用。为了比拟分枝杆菌诱导的细胞毒性作用，将MC38癌细胞与CD8+T细胞共培育，CD8+T细胞已与感化了各类类型rSmeg的骨髓起源的DC共培育，发现分枝杆菌感化的DC之间的T细胞活化没有差别。然而，与rSmeg-hMIF或rSmeg-hIL-7相比rSmeg-hMIF-hIL-7感化的树突细胞显著诱导了可能杀死MC38癌细胞的CD8+T细胞，招致癌细胞中MIF的排泄削减；rSmeg-hMIF-hIL-7诱导的CD8+T细胞在MC38细胞存在下显著排泄炎性细胞因子。

rSmeg-hMIF-hIL-7通过下调MIF和PI3K/Akt旌旗灯号克制肿瘤停顿，C57BL/6小鼠皮下打针MC38 细胞，并在肿瘤植入后第3、7和14天打针分枝杆菌 图片起源：http://dx.doi.org/10.1136/jitc-2021-003180

在MC38荷瘤小鼠模子中，与磷酸盐缓冲盐溶液(PBS)、BCG和Smeg相比，rSmeg-hMIF-hIL-7显着克制了肿瘤停顿，与其他组相比，rSmeg-hMIF-hIL-7的医治性给药显著克制了肿瘤成长。与PBS相比，Smeg 和rSmeg-hMIF-hIL-7中的血清MIF程度（肿瘤血管天生的紧张调理剂）均下降，但与Smeg相比，rSmeg-hMIF-hIL-7细胞的MIF程度下降最为显著，此外，与一切其他组相比rSmeg-hMIF-hIL-7的给药诱导血清中抗人MIF IgG1、IgG2c和总IgG的发生添加。与一切其他组相比，在rSmeg-hMIF-hIL-7中，MIF辅助受体CD74和CD44的外表表白下降，它们匆匆进了癌细胞增殖和迁徙的上游旌旗灯号通路，对癌细胞侵袭和转移至关紧张的基质金属卵白酶MMP-2和MMP-9的发生在相应rSmeg-hMIF-hIL-7医治时遭到显著克制，rSmeg-hMIF-hIL-7中响应基因的转录程度显着下降。这些成果标明rSmeg-hMIF-hIL-7下降了MIF的致瘤作用，加强了其对肿瘤的医治后果。

rSmeg-hMIF-hIL-7通过在肿瘤情况中召募功效性T细胞来诱导抗肿瘤免疫反馈 图片起源：http://dx.doi.org/10.1136/jitc-2021-003180

因为rSmeg-hMIF-hIL-7给药下降了血清和肿瘤中的MIF程度，肿瘤微情况中的免疫细胞数目产生了变动，肿瘤中髓源性克制细胞(MDSC)的积聚依赖于MIF，是以通过流式细胞术评价了rSmeg-hMIF-hIL-7给药后肿瘤中的31个MDSC亚群。与一切其他组相比，rSmeg-hMIF-hIL-7组的总MDSC、单核细胞MDSC(M-MDSC)和粒细胞MDSC(G-MDSC)的数目显著削减，此外，在外表MIF受体中，M-MDSC中CXCR2和CXCR4的外表表白以及G-MDSC中CXCR4和CXCR7 的外表表白因rSmeg-hMIF-hIL-7而下降，标明rSmeg-hMIF-hIL-7克制MDSC向肿瘤的浸润。在肿瘤浸润的MDSC中，与一切其他组相比，rSmeg-hMIF-hIL-7中开释IL-10的M-MDSC和G-MDSC削减。