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3.

doi :10 . 3389/FIM mu . 2021 . 686433394306

南卡罗来纳医科大学霍林斯癌症中心研究员莱昂纳多费雷拉博士因其在调节性T细胞(Treg)方面的开创性工作而备受关注。最近，何和他的合作者在《免疫学前沿》杂志上发表了一篇题为“移植免疫调节性t细胞中抗HLA-A2中国抗癌受体的精密工程”的文章。e耐受性”，描述了他利用表达嵌合抗原受体(CAR)的Treg细胞(CAR-treg)解决移植耐受性挑战的经验。

产生嫁接的A2-CAR，图片来源于免疫学前沿，2021，doi :10.3389/fimmu。59960 . 97979999961

费雷拉说，本文描述的研究是最早通过使用名为CRISPR-Cas9的基因编辑方法精确设计CAR-Treg细胞的研究之一。这种方法就像用手术刀精确去除Treg细胞的原始TCR，然后将CAR插入其位置。这种方法更安全，因为它确保了只有一个CAR副本存在，并且CAR以与原始TCR相同的方式进行调整。

具体来说，费雷拉和他的团队描述了一种抗HLA-A2 CAR(A2-CAR)，它是通过将人单克隆抗HLA-A2抗体的互补决定区(CDR)嫁接到赫赛汀4D5单链可变片段的框架区，并将其与CD28-zeta信号域融合而产生的。CDR嫁接的A2-CAR保持了原抗体的特异性。

然后，他们通过CRISPR/Cas9消除人Treg细胞的内源性TCR，并通过慢病毒转导引入A2-CAR，或者通过同源定向修复(HDR)将CAR构建体直接整合到TCR 恒定位点，从而产生HLA-A2单特异性人CAR-Treg细胞(A2-CAR-Treg)。这些TCR缺乏的人A2-CAR-Treg细胞在体外维持了Treg细胞的表型和功能。

此外，缺乏TCR的A2-CAR-Treg细胞选择性地在从HLA-A2转基因小鼠或已故人类供体移植的HLA-A2胰岛(即表达HLA-A2的胰岛)中积累。它们没有破坏这些HLA-A2胰岛的功能，而缺乏TCR的类似A2-CAR CD4传统T细胞在不到2周的时间内就排斥了HLA-A2胰岛。缺乏TCR的A2-CAR-Treg细胞只有在共转外周血单个核细胞或受体小鼠表达的HLA-A2存在时，才会延缓移植物抗宿主病。

4.

doi:10.1200/JCO.21.01405

虽然CD19靶向治疗取得了良好的效果，但复发仍然是一个严重的问题。在Tisagenlecel的临床试验中，CR患者的24个月无复发生存率(RFS)为62%。无论是CD19-CAR还是Blinatumomab，复发的常见机制都是靶抗原的下调或逃逸。鉴于CD19调节的潜力，持续靶向CD19可能会增加无反应或复发的风险。由于担心CD19阴性逃逸、复发风险、CD19-CAR无反应以及Blinatumomab和CD19-CAR的使用增加，Regina M Myers教授和她的团队最近就此类问题进行了相关研究，试图评估Blinatumomab暴露与CD19-CAR后续治疗结果之间的关系。

研究人员对2012年至2019年接受CD19-CAR的复发或难治性ALL儿童和年轻患者进行了一项多中心回顾性研究。该研究的主要终点是6个月无复发生存期(RFS)和无事件生存期(EFS)，根据Blinatumomab的治疗计划进行分层。次要目标包括比较长期生存结果、完全缓解率、CD19调节和识别与EFS相关的因素。

在这40名患者中，77名(18.3%)以前接受过Blinatumomab治疗。与未使用Blinatumomab的患者相比，接触Blinatumomab的患者KMT2A重排更频繁。在能够评价对CD19-CAR反应的患者中(n=412)，blinatumab对CD19-CAR无反应的患者的完全反应率(20/31，64.5%)低于blinatumab无反应的患者(39/42，92.9%)或新诊断的blinatumab患者(317/339，339)在CD19-CAR治疗后，blinatumab未支持者在6个月时的EFS更差(27.3%；95%置信区间，13.6 ~ 43.0)。

5.

doi :10.1126/scitranslmed . abh 0272

嵌合抗原受体(CAR)T细胞(CAR-T)疗法是一种免疫疗法，正在给一些血液肿瘤、实体瘤和慢性病毒感染患者带来临床变化。在一项新的研究中，美国圣犹大儿童研究医院的研究人员现在已经确定了表观遗传程序是如何驱动T细胞衰竭的。他们的研究表明敲除DNMT3A基因如何重新激活CAR-T细胞反应，这将对测试这种治疗方法的下一代临床试验产生影响。相关研究成果于2021年11月17日发表在《科学转化医学》杂志上，标题为“删除汽车t细胞中的DNMT 3A预防衰竭和增强抗肿瘤活性”。

DNMT3A的缺失增强了体外重复刺激过程中CAR-T细胞的扩增。图片来自science转化医学，2021，doi :10.1126/sci transmed . abh 0272。

尽管临床试验表明CAR-T细胞疗法可能对某些疾病提供持久的反应，但由于T细胞衰竭，这种疗法可能受到很大限制。然而，从CAR-T细胞中排除DNMT3A基因(编码DNA甲基转移酶3)一般会保留其攻击癌细胞的能力。

该论文的合著者、圣犹大儿童研究医院骨髓移植和细胞治疗部的Giedre Krenciute博士说，“当CAR-T细胞被基因改造以特异性识别和攻击肿瘤时，它们有可能比化疗或放疗等传统疗法更有效、更安全。通过在不同实体瘤模型中评估靶向一系列肿瘤抗原的人CAR-T细胞，我们发现无论我们靶向哪种肿瘤类型或抗原，敲除DNMT3A都是有效的。这凸显了DNMT3A在控制人类CAR-T细胞功能方面的核心作用，我们非常高兴在未来将我们的方法转化为早期阶段的临床试验。”