Nat Commun：鉴定出CAR

2021年4月27日讯/BIOON/---胰腺癌是一种覆灭性的疾病。在过来的几十年里，这种癌症的5年总生活率仍旧不敷5%，未产生较年夜变动，今朝它是东方国度癌症相关灭亡的第四年夜起因。手术仍旧是独一有能够治愈这种癌症的办法，但只有约20%的患者在时处于手术可切除的疾病阶段。在最先进的医治办法下，手术可切除的患者的中位总生活期为26个月，然罢了产生转移的患者的中位总生活期为不到6个月。是以，对新医治方案的需求尚未获得知足。嵌合抗原受体（CAR）T细胞（CAR-T）是一种新的有出路的医治办法。对胰腺导管腺癌（PDAC）进行无效细胞免疫医治的一个次要阻碍是缺乏适宜的特同性抗原。

在一项新的研讨中，德国研讨职员进行了教训性挑选旨在发现医治PDAC的CAR候选靶标，确定了四个候选靶标：CLA、TSPAN8、CD66c和CD318。他们发现CLA在上皮性上表白。相关研讨成果近期颁发在Nature Communications期刊上，论文题目为“Identification of CD318, TSPAN8 and CD66c as target candidates for CAR T cell based immunotherapy of pancreatic adenocarcinoma”。

到今朝为止，CLA只被以为是一种共同的皮肤归巢受体，在T细胞、B细胞、NK细胞、朗格汉斯细胞、单核细胞和树突状细胞的亚群中表白。它是SELPLG卵白的一种特别的糖基化模式，通过与E-选择素、L-选择素和P-选择素联合在免疫细胞的组织浸润中起作用。因为它只在这些细胞类型的亚群上表白，这些作者推测它能够是一个适宜的CAR-T细胞靶标，具备可承受的外毒性。然而，因为它的表白在活化的T细胞上产生上调，它组成了发生功效性CAR-T细胞的一个技术阻碍。CLA特同性CAR-T细胞的表示更差，这凸显了CAR-T细胞对本身抗原特同性的内涵成绩。迷信家们为这个成绩开辟了潜在的解决方案。一些人建议用CRISPR/Cas介导的办法敲除T细胞内的抗原，另一些人则主张应用内质网滞留构造域与本身抗原特同性的scFv联合，将本身抗原捕捉到T细胞中。

其他确定的候选靶标CD66c、CD318和TSPAN8已被描写为在一些癌症实体中适度表白。联合这些作者的抗体驱动的挑选、全面的阐发和免疫荧光阐发，他们添加一个紧张的常识，即这些候选靶标的表白不仅在PDAC肿瘤细胞中高度富集，并且在人体中的表面达也遭到限定。这种办法的无效性的一个强无力的支持是，他们确定了曾经用于CAR-T细胞医治的靶标，如CEACAM5（CEA）或PROM1（CD133）。

鉴定PDAC CAR候选靶标，图片来自Nature Communications, 2021, doi:10.1038/s41467-021-21774-4。

这些作者在体外评价了32种在scFv定位和距离区长度上存在差别的CAR构建体。对CD318和CD66c而言，较短的距离区显示出最高的功效性，而基于较长距离区的TSPAN8特同性CAR构建体表示更好。CD318具备最长的细胞外氨基酸链（638），其次是CD66c（320）和TSPAN8（24和96）。虽然对scFvs切实其实切表位和细胞外构造域的三维构造缺乏相识，然则这些发现很好地与曩昔的查询拜访相吻合，指出较长的距离区对膜近端表位有劣势，反之亦然。

此外，这些作者发现，在两个自力的临床前研讨中，他们的四种体表面现最好的CAR构建体也表示出了抗的功能。CD318 XS Vh-Vl CAR和TSPAN8 S Vh-Vl CAR被证明长短常有出路的候选CAR，基于它们的高效劳，可以进一步进行临床前评价和潜在的临床评价。在两种异种移植模子的一种中，CD66c S Vl-Vh CAR在体外疗效方面要后进些，但仍能诱导疾病稳定。

这些作者发现CD66c特同性CAR-T细胞的活性降低不是因为靶标下调惹起的，并且脾脏中的CAR-T细胞数目与其他医治组有关，是以扫除了耐久性这个成绩。在部位，他们发现巨噬细胞和CAR-T细胞的浸润削减，这标明CAR-T细胞的浸润和潜在激活能够遭到侵害。其他研讨已标明，抗原非依赖性旌旗灯号转导（tonic signaling）可招致体外和体内研讨中的这种差别。然而，他们没有察看到与靶标阴性细胞共培育的CAR-T细胞的配景激活。当改用基于CD66c XS的CAR构建体时，他们发现这种CAR构建体在体内的表示更精彩，虽然在体外只察看到巨大的差别。一个次要的区别是就XS构建体而言，IL-2和其他细胞因子的开释更精彩。据察看，IL-2的发生标明有一种恰当的功效性共刺激构造域。此外，IL-2在完成共刺激旌旗灯号对T细胞生活、增殖和体内耐久性的踊跃作用中起着症结作用。

在能够的临床转化方面，这些作者发现CD66c和CEA的堆叠表白，使其成为一个乏味的候选靶标。现实上，曾经证实CD66c比CEA在恶性组织中更多地适度表白。这一发现能够有助于制作微调的CAR，以便可能区分肿瘤细胞和安康细胞的分歧表白程度。然而，CD66c在中性粒细胞和其他髓样细胞上的表白程度凸显了通过血液中年夜量的CAR-T细胞反馈性诱发重大的细胞因子开释综合征（CRS）的危险，这在用CD19特同性CAR-T细胞医治的B-ALL患者中察看到，特殊是在负荷高的患者中。