人脂肪干细胞源外泌体对HaCaT细胞损伤修复及迁移功能影响

临床上，各种炎症、溃疡、烧伤等造成皮肤的损伤修复是亟需解决的问题。研究表明，脂肪组织来源的促进皮肤创伤修复的一个重要作用途径是旁分泌，旁分泌的外泌体可能是促进创伤愈合的关键因素。与直接使用相比，富集了来源细胞的蛋白质、mRNA和等信号分子的外泌体具有生物相容性、低毒性、低免疫原性等安全性特性。相对于其他来源，人脂肪（human adipose-derived stem cells，hADSC）来源容易且体外扩增速度快，外泌体获得更为容易，因此hADSC的外泌体更适合运用于皮肤创伤修复。

为了初步探究人脂肪干细胞源外泌体对表皮细胞迁移功能的影响， 深圳大学第一附属医院张远远，曾悦，朱艳霞，等人从正常人抽脂手术中获取的脂肪组织分离培养脂肪，采用超速离心和超滤结合的改良法分离收集细胞上清液中的外泌体，采用透射电镜、动态光散射法以及Western印迹法鉴定分离出的外泌体。采用0、50、100、200、250、300、400、500、600、800 μmol/L H2O2分别作用HaCaT细胞1 h，CCK8法检测H2O2对HaCaT细胞存活率的影响。将HaCaT细胞分为正常组（无预处理）和损伤组（用100 μmol/L H2O2损伤预处理0.5 h），再将两组分别分为对照组和治疗组，治疗组与外泌体共培养，对照组不与外泌体共培养。用共聚焦荧光显微镜观察PKH26荧光标记的外泌体是否能被细胞吞噬，用划痕实验观察HaCaT细胞修复率，用Transwell实验评估细胞迁移能力。多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用LSD检验，相关性检验采用Spearman检验。

透射电镜观察显示，分离所得的脂肪源外泌体是直径60 ~ 80 nm的茶托样囊泡，而动态光散射法测量显示，分离的外泌体纯度为65.88%，表达CD63、Alix和TSG101，具有外泌体的基本特征。CCK8法显示，0 ~ 800 μmol/L H2O2处理HaCaT细胞1 h后细胞存活率呈逐渐降低趋势，H2O2浓度与HaCaT细胞存活率呈负相关（r = -0.91，P 0.01）。共聚焦荧光显微镜观察，分离的外泌体能被损伤后的HaCaT细胞摄入。划痕实验显示，正常对照组、正常治疗组、损伤对照组、损伤治疗组HaCaT细胞12 h划痕面积修复率分别是40.26% ± 0.64%、69.57% ± 0.69%、32.28% ± 0.31%、69.62% ± 1.68%，损伤治疗组显着高于损伤对照组（t = 37.33，P 0.01）。Transwell实验结果显示，4组10倍视野下迁移细胞数分别是20.85 ± 4.84、44.8 ± 5.24、14.95 ± 2.58、40.05 ± 7.66，损伤治疗组大于损伤对照组（t = 25.10，P 0.01）。

人脂肪源外泌体具有促进氧化应激损伤的HaCaT细胞迁移的能力。(100yiyao.com）

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