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来源：原创网站2021-12-27 20:27

甲状腺间变性癌(ATC)是一种侵袭性和高转移性癌症，其表达高水平的microRNA(MiR)17-92簇。

甲状腺间变性癌(ATC)是一种侵袭性和高转移性癌症，其表达高水平的microRNA(MiR)17-92簇。基于ATC SW579细胞系种子序列的同源性，作者利用miR抑制系统研究了miR-17-92簇中不同miRs的功能。尽管四个miR-17-92家族中有三个是致癌的，但作者在体外和体内发现了miR-17作为抑制剂的新作用。

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人类13号染色体上的MiR-17-92簇：miR17HG以单个转录物的形式表达，然后加工成6个成熟的MicroRNA(MiR-17、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b和miR-92)。MiR-17和miR-20a具有相同的种子区序列，如domir-19a和miR-19b，而miR-18a和miR-92a。通过种子序列鉴定，PMIS系统可用于特异性抑制靶miR的功能。

为了抑制miR-17-92簇中不同的miRs，设计了不同的PMIs结构来靶向miR-17、miR18a、miR-19a和miR-92a-1的种子区。用表达绿色荧光蛋白的PMIs慢病毒构建体感染SW579，建立了稳定的细胞系。作为对照，作者使用表达pMIs null的SW579细胞系作为对照，其不抑制miR功能。

通过将miR-17-92成员的结合位点克隆到psiCHECK-2荧光素酶报告基因的30UTR中，构建荧光素酶报告基因以检测miR-17-92成员的活性。SW579细胞内源性表达miR-17-92簇和单个家族成员。在表达非特异性pMIS的SW579细胞中，与缺乏miR-17结合位点的报告相比，增加miR-17结合位点的报告导致标准化信号减少90%。

在确认每个稳定细胞系的miR抑制后，将每个细胞系的形态与表达非特异性PMIS载体的SW579细胞进行比较。作为生长对照，SW579、SW579-PMIS载体和SW579-PMIS-miR-17细胞在生长12小时后出现。表达pMIS载体pMIS-miR-18a、pMIS-miR-19a和n dPMIS-miR-92a-1的细胞在培养96小时后保持不变。

为了确定抑制miR-17是否针对SW579细胞，我们还建立了稳定表达pMIS载体pMIS-miR-17的MDA-T32甲状腺乳头状癌细胞系。实验表明，抑制miR-17也能促进MDAT32细胞的增殖，但稳定表达pMIS载体的细胞与亲代细胞没有差异。

作者对体内结果显示miR-17抑制生长感到惊讶。研究表明，miR-17的高表达会导致肿瘤，它已被用作。然而，一些研究表明，其他miR-17-92家族成员与进展有关。为了确定miR-17-92簇中的其他miR是否由于miR-17的抑制而增加，设计了引物来检测pri-miR-17-92簇中转录物的不同区域。

有趣的是，在表达PMIS-miR-17的SW579细胞中，通过用于测量其表达的每个引物组检测到更多的pri-miR-17-92簇，这表明miR-17调节pri-miR-17-92簇的转录。此外，抑制miR-17的活性将增加成熟miR-18a、miR-19a和Asmir-92a的表达。

MiR-17作为变阻器调节ATC细胞中miR17-92簇的表达。

图像：

这些数据表明，miR-17在ATC中的作用不同于以miR-17-92集群为代表的其他家族。这一发现与前一组的结果不同，前一组的结果显示miR-17在ATC13中具有致癌性。该组使用不同的ARO细胞系，SW579细胞可能受不同的基因调控网络控制。然而，他们也没有使用稳定表达PMIS-miR-17抑制剂的细胞，这允许分离miR功能。

同样，作者也证明了抑制MDA-T32细胞中的miR-17会导致细胞增殖的增加。有趣的是，这些细胞表达高水平的内源性miR-17，我们发现miR-17靶向CCND2并抑制细胞增殖。质粒DNA在SW579细胞中过量表达miR-17对CCND2的转录水平有显著影响，但影响不大。此外，在内源性miR-17高表达的背景下，miR-17的过表达对细胞形态和增殖影响不大。然而，作者发现ATC细胞中miR-17的上调与致癌作用的增强无关。(100yiyao.com)

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