应用CRISPR/Cas9基因编纂技巧创制出非转基因高油酸棉花新种质

11月1日，山东棉花研讨中间遗传育种团队研讨员柳展基和华中农业年夜学棉花改进团队传授金双侠在《植物生物技巧杂志》在线揭橥论文，初次报道了应用CRISPR/Cas9基因编纂技巧创制出非转基因高油酸棉花新种质的研讨成果，为改进棉籽油品德和高油酸棉花分子育种奠基了根底。

该研讨以棉花GhFAD2-1A/D基由于靶标，辨别在其DUF3474和Fatty acid desaturase构造域设计了2个靶点，应用pRGEB32-GhU6.9-NPT II构建了GhFAD2-1A/D基因的双靶点编纂，经过农杆菌转化棉花品系Jin668，取得了35株自力的T0代再生植株，经PCR检测，发明25株（71.43%）含有编纂上的NPTII和Cas9基因。

应用Sanger测序检测发生的渐变，发明2个靶点均有渐变产生。在25株阳性自力植株中，有19株（无效率76%）在目的位点检测到渐变。渐变类型以单碱基拔出缺掉为主，同时也检测到了长片断碱基缺掉，为2个sgRNA配合感化的成果。

应用PCR和Sanger测序检测T1植株，发明一切T0渐变均波动到T1代，同时也在T1代中发明了新的渐变。尤其主要的是，在T1代中检测到了4个无载体挑选标志基因的渐变单株，被称为非转基因渐变株。

棉花基因组中含有21个GhFAD成员，作者应用Sanger测序具体剖析了19个潜在的脱靶位点，成果未检测到脱靶效应。

应用GC-MS剖析了4个非转基因渐变单株种子的脂肪酸组分，与对比Jin668比拟，渐变体种子中的油酸含量明显降低，亚油酸含量明显下降。以m20-2为例，油酸含量由13.94%（对比）进步到77.72%，亚油酸含量由58.62%（对比）下降到6.85%，同时棕榈酸含量也明显下降。(100yiyao.com）